L'effetto antiproliferativo è

Cibo

Quando si verifica un'infezione nel corpo umano, le reazioni immunitarie si sviluppano con complesse interazioni cellulari. I regolatori di queste interazioni sono speciali molecole proteiche - citochine. Ad oggi, sono state studiate più di 200 diverse molecole di segnalazione. La loro peculiarità è che essi stessi non possono avere alcun effetto sugli antigeni estranei e servono esclusivamente a trasferire informazioni da una cellula all'altra. Senza la partecipazione di citochine, lo sviluppo di una normale risposta immunitaria è impossibile. Una delle citochine chiave è l'interferone.

Esistono tre tipi di interferone: l'interferone-alfa (INF-α), l'interferone-betta (INF-β), l'interferone-gamma (INF-γ). Tutti gli interferoni hanno effetti antivirali, immunomodulatori, antitumorali e antiproliferativi. Oltre alle proprietà generali, gli interferoni presentano una serie di differenze.

INF-α e INF-β sono più simili tra loro. I loro geni si trovano sul cromosoma 9. Per generare sia segnali induttori sono virus. Hanno un pronunciato effetto antivirale e antitumorale, in misura molto minore, esibiscono proprietà immunomodulanti. Le cellule principali che producono per INF-α sono macrofagi, per cellule epiteliali INF-β, fibroblasti.

INF-γ ha un effetto immunomodulatore pronunciato, insieme a interleuchina-2 (IL-2) e fattore di necrosi tumorale (TNF o TNF) è la principale citochina pro-infiammatoria, è un induttore del legame cellulare di immunità. Le proprietà antivirali e antitumorali sono meno pronunciate di quelle di INF-α e INF-β. Il gene INF-γ si trova nel cromosoma 12, le cellule principali che producono sono linfociti T, cellule killer naturali o naturali (cellule NK). Il segnale induttivo per la produzione può essere qualsiasi antigene o altre citochine.

L'effetto antivirale degli interferoni consiste nel sopprimere la sintesi dell'RNA virale, sopprimendo la sintesi delle proteine ​​dell'involucro virale. Il meccanismo di questo effetto è l'attivazione di enzimi intracellulari, come ad esempio la protein chinasi o l'adenilato sintetasi. La protein chinasi distrugge il fattore di attivazione della sintesi proteica con l'RNA messaggero, che inibisce la sintesi proteica. Adenilato sintetasi: causa la sintesi di sostanze che distruggono l'RNA virale.

L'effetto immunomodulatore degli interferoni è la capacità di regolare l'interazione delle cellule coinvolte nella risposta immunitaria. Gli interferoni eseguiranno questa funzione regolando la sensibilità delle cellule alle citochine e l'espressione sulle membrane cellulari delle molecole del complesso principale di istocompatibilità di tipo I (GCG1). Migliorare l'espressione di GKG1 sulle cellule infettate dal virus aumenta significativamente la probabilità che vengano riconosciute da cellule immunocompetenti ed elelenii dal corpo. INF-γ ha le proprietà immunomodulatorie più pronunciate: essendo un prodotto dei linfociti T di tipo I, insieme ad altre citochine proinfiammatorie attiva i macrofagi, i linfociti T-citotossici, le cellule natural killer (cellule NK), inibisce l'attività dei linfociti B, attiva le prostaglandine e sistemi corticosteroidi. Tutti questi fattori aumentano le reazioni fagocitiche e citotossiche nell'area del focus infiammatorio e contribuiscono all'eliminazione efficace dell'agente infettivo.

L'effetto antitumorale degli interferoni è associato alla loro capacità di rallentare o inibire la crescita della coltura cellulare e di attivare i meccanismi antitumorali del sistema immunitario. Questa proprietà dell'interferone è stata scoperta molto tempo fa ed è ampiamente utilizzata a scopi terapeutici. Tutti gli effetti antitumorali dell'interferone sono suddivisi in diretti e indiretti. Diretti sono associati alla capacità di avere un effetto diretto sulle cellule tumorali, sulla loro crescita e differenziazione. Indiretto è associato al potenziamento della capacità delle cellule immunocompetenti di rilevare e distruggere le cellule atipiche del corpo.

Effetti antitumorali diretti dell'interferone:

  • Inibizione della sintesi dell'RNA.
  • Soppressione della sintesi proteica.
  • Stimolazione delle cellule indifferenziate alla maturazione.
  • Aumento dell'espressione degli antigeni della membrana delle cellule tumorali e dei recettori ormonali.
  • Violazione dei processi di formazione dei vasi.
  • Neutralizzazione degli oncovirus.
  • Soppressione dei fattori di crescita tumorale.

Effetti antitumorali indiretti dell'interferone:

  • Stimolazione dell'attività delle cellule del sistema immunitario (macrofagi, cellule NK, linfociti T-citotossici).
  • Miglioramento dell'espressione sulle cellule delle molecole di classe I di istocompatibilità.

L'effetto antiproliferativo degli interferoni consiste nella capacità degli interferoni di mostrare proprietà citostatiche - inibire la crescita cellulare sopprimendo l'RNA e la sintesi proteica, oltre a inibire i fattori di crescita che stimolano la proliferazione cellulare.

Glucocorticoidi (effetto antiproliferativo)

L'effetto antiproliferativo dei glucocorticoidi è associato alla limitazione dell'esposizione monocitaria al fuoco infiammatorio e all'inibizione della divisione dei fibroblasti sia dagli stessi ormoni che una diminuzione dell'effetto stimolante su di essi dell'istamina, della serotonina e delle chinine, la cui formazione è diminuita dagli steroidi sopra menzionati.

Inoltre, i glucocorticoidi sopprimono la sintesi di mucopolisaccaridi e quindi limitano il legame delle proteine ​​dell'acqua e del plasma con i tessuti, che, insieme all'essudato, sono legati al fuoco dell'infiammazione reumatica. Di conseguenza, il gonfiore e, soprattutto, lo sviluppo della fase fibrinoide dell'infiammazione reumatica e quindi della ialinosi, sono ridotti.

Di conseguenza, le violazioni nella struttura delle valvole del cuore, del miocardio, dei vasi sanguigni, ecc. Vengono prevenute o ridotte in modo significativo: l'effetto più positivo si sviluppa quando si usano i glucocorticoidi insieme a farmaci anti-infiammatori non steroidei.

I glucocorticoidi sono anche utilizzati per compensare la loro carenza nel corpo e per l'impatto normativo sulle funzioni compromesse.

Al fine di correggere gli ormoni glucocorticoidi mancanza quando usato come insufficienza primaria surrenalica (morbo di Addison, emorragia nella corteccia surrenale nella sepsi, lesioni nascita, ipossia), caratterizzato insufficienza e gluco e mineralcorticoidi, ea insufficienza surrenalica secondaria (ipopituitarismo, sistema inibizione ipotalamico - ipofisi - corteccia surrenale a causa dell'uso a lungo termine di glucocorticoidi), caratterizzata da insufficienza di glucocorticoidi solo.

"Farmacologia pediatrica", I.V. Markova

La prescrizione di corticosteroidi a giorni alterni può prevenire o ridurre l'inibizione dell'ipotalamo - sistema ipofisario ----------------- delle ghiandole surrenali e la soppressione della resistenza non specifica alle infezioni. J. Melby (1977) ha elencato le indicazioni per cui, nella maggior parte dei pazienti, i glucocorticoidi possono essere prescritti a giorni alterni, così come le malattie per le quali ciò non è possibile. È possibile utilizzare i glucocorticoidi a giorni alterni per le seguenti malattie: bronchiale...

Quando si prescrivono corticosteroidi in casi che non richiedono un trattamento di emergenza, si raccomanda di tenere conto del ritmo giornaliero della secrezione di ormoni endogeni della corteccia surrenale. All'inizio del trattamento, la maggior parte delle dosi (solitamente 2/3) devono essere prescritte al mattino, da 7 a 8 ore, il resto - nel pomeriggio, dalle 13 alle 14. Quando si divide la dose giornaliera in tre dosi, vengono somministrate a 7, 10...

Il mineralcorticoide naturale - l'aldosterone - è prodotto dalla zona glomerulare della corteccia surrenale; Questo processo è regolato dall'angiotensina II, che si forma sotto l'influenza della renina. Deoxycorticosterone acetato (DOXA) e DOX-trimetil acetato sono usati come farmaci. Indicazioni per l'uso. I mineralcorticoidi sono usati per la tossicosi intestinale in associazione alla terapia infusionale. Sono anche usati nell'ipotensione acuta associata alla perdita di sodio e acqua (ma...

Indicazioni per la somministrazione a lungo termine di alte dosi di glucocorticoidi. Vengono utilizzati per diverse settimane e persino mesi nel trattamento dell'anemia emolitica autoimmune, della porpora trombocitopenica, di alcune nefriti, della colite ulcerosa, della sarcoidosi, della leucemia acuta, della malattia di Hodgkin generalizzata, della cardite non reumatica, talvolta con grave asma bronchiale. Nella maggior parte dei casi, l'effetto terapeutico qui dipende dalla soppressione delle reazioni di citolisi, in particolare della genesi allergica....

Steroidi anabolizzanti: methandrostenolone (Dianabol, nerobol), methylandrostediol (methandriol), phenobolin (durabolin, nerobolil), retabolil - sostanze ottenute per sintesi da ormoni sessuali maschili (androgeni). Gli androgeni hanno due effetti distinti: androgeno (cioè, stimolando lo sviluppo di caratteristiche sessuali secondarie) e anabolico. Gli steroidi anabolizzanti differiscono dagli androgeni nella struttura e le loro proprietà androgene sono nettamente ridotte (100 volte o più)....

Farmaci antiproliferativi - Elenco di farmaci e farmaci

Descrizione dell'azione farmacologica

L'azione antiproliferativa mira a sopprimere l'eccessiva proliferazione di varie cellule. Il meccanismo d'azione è diverso e dipende dal farmaco specifico e dal tipo di cellule su cui è diretta questa azione. In particolare, il meccanismo di questa azione può essere associato alla fornitura di un effetto modulante sulla sintesi di alcuni oncogeni, che porta alla normalizzazione della trasformazione delle cellule neoplastiche e all'inibizione della crescita del tumore. Oppure il meccanismo d'azione può essere basato sull'inibizione della proliferazione dei fibroblasti, stimolata dal fattore principale della crescita dei fibroblasti. Farmaci con effetti antiproliferativi sono utilizzati nel trattamento e nella prevenzione di varie malattie oncologiche, adenoma prostatico e varie malattie croniche della pelle (ad esempio, la psoriasi).

Ricerca di droghe

Preparati con azione farmacologica "Antiproliferativa"

  • la
  • Avonex (Lyophilisate per preparazione di soluzione per iniezioni)
  • Avonex (soluzione per somministrazione intramuscolare)
  • Adenostop (concentrato per la preparazione della soluzione orale)
  • Altevir (soluzione iniettabile)
  • Alfaferon (soluzione iniettabile)
  • Arava (compresse orali)
  • B
  • Beloderm (crema per uso esterno)
  • Beloderm (pomata per uso esterno)
  • D
  • Genferon (Suppositories rettali)
  • Genferon Light (Spray nasale)
  • D
  • Dilatrend (compresse orali)
  • L
  • Leflunomide (sostanza in polvere)
  • Leflunomide (compresse orali)
  • P
  • Permixon (capsula)
  • P
  • Realdiron (Lyophilisate per preparazione della soluzione per amministrazione sottocutanea)
  • Ronbetal (Soluzione per somministrazione sottocutanea)
  • T
  • Tadenan (capsula)
  • Tykveol (olio per somministrazione orale)
  • Tykveol (Suppositories rettali)
  • Tykveol (capsula)

Attenzione! Le informazioni presentate in questa guida ai farmaci sono destinate ai professionisti medici e non dovrebbero costituire una base per l'auto-trattamento. Le descrizioni dei farmaci sono fornite per familiarizzare e non sono intese per la nomina del trattamento senza la partecipazione di un medico. Ci sono controindicazioni. I pazienti hanno bisogno di un parere esperto!

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antiproliferativo

L'azione antiproliferativa mira a sopprimere l'eccessiva proliferazione di varie cellule.

Il meccanismo d'azione è diverso e dipende dal farmaco specifico e dal tipo di cellule su cui è diretta questa azione. In particolare, il meccanismo di questa azione può essere associato alla fornitura di un effetto modulante sulla sintesi di alcuni oncogeni, che porta alla normalizzazione della trasformazione delle cellule neoplastiche e all'inibizione della crescita del tumore. Oppure il meccanismo d'azione può essere basato sull'inibizione della proliferazione dei fibroblasti, stimolata dal fattore principale della crescita dei fibroblasti.

Farmaci con effetti antiproliferativi sono utilizzati nel trattamento e nella prevenzione di varie malattie oncologiche, adenoma prostatico e varie malattie croniche della pelle (ad esempio, la psoriasi).

Agente antiproliferativo

L'invenzione riguarda l'industria farmaceutica, in particolare i mezzi di origine naturale, con attività antiproliferativa. L'agente con attività antiproliferativa, è un estratto di proteina di Toxocara canis, ottenuto estraendo una soluzione tampone fosfato-salina omocianato di T. Canis con un pH di 7,2 nel rapporto di 1:10 per 36-48 ore a 4 ° C, centrifugazione. Lo strumento di cui sopra ha un'attività antiproliferativa pronunciata. 1 hp f-ly, 1 tab., 2 ex.

L'invenzione si riferisce al campo della medicina e della medicina veterinaria, in particolare a un nuovo mezzo di origine naturale, che ha un effetto antiproliferativo.

La medicina moderna ha un arsenale abbastanza ampio di farmaci per la chemioterapia dei tumori. La maggior parte degli agenti chemioterapici sono rappresentati da gruppi di farmaci antineoplastici alchilanti, antimetaboliti, antibiotici antitumorali, farmaci ormonali antitumorali, immunomodulatori e alcuni altri con un diverso meccanismo di azione. La maggior parte di questi farmaci antitumorali sono molto tossici e pertanto lo schema e la durata della chemioterapia sono scelti tenendo conto della manifestazione degli effetti collaterali, che influisce sull'efficacia del trattamento in generale.

Sono noti farmaci antitumorali naturali di origine vegetale (alcaloidi della vinca rosea (vinblastina, vincristina), alcaloidi dell'albero di tasso (taxani) (paclitaxel, docetaxel); )) e di origine batterica (rubromicina e altri), che hanno un uso limitato anche a causa dell'elevata tossicità e dello stretto spettro terapeutico d'azione (trattamento di alcuni tipi di s tumore, preferibilmente con una crescita esofitica).

Di conseguenza, vi è la necessità di nuovi farmaci antitumorali di elevata efficacia, di origine naturale, che abbiano un ampio spettro di azione e siano meno tossici.

Elminti - il nome comune per vermi parassiti che vivono negli esseri umani, altri animali e piante che causano infezioni da elminti.

Gli elminti includono rappresentanti di tenie, o cestodi, trematodi o trematodi (entrambi questi gruppi appartengono a platelminti) e nematodi o nematodi.

Questi ultimi includono toxocars (in particolare, Toxocara canis). T. canis è un parassita nematode nell'intestino dei carnivori, come i cani; malattia invasiva nota come toxocariasis.

Durante il parassitismo, gli elminti producono e rilasciano vari prodotti metabolici. I prodotti di escrezione secretoria-escretrici di elminti sono sostanze innaturali per l'organismo ospite nei suoi processi fisiologici.

È noto che i patogeni delle invasioni possono avere un effetto modulante sul decorso di molte malattie della più varia eziologia, comprese quelle maligne (ad esempio, Vasilev S. et al. (2015).In particolare, ci sono segnalazioni che l'infezione da nematodi Trichinella spiralis ( riproduzione della trichinosi) porta alla soppressione della crescita delle cellule maligne e aumenta la sopravvivenza degli animali dopo l'inoculazione delle cellule di melanoma B-16 in vivo (Molinari JA, Ebersole JL, 1977; Pocock D., Meerovitch E., 1982; Kang YL et al., 2013 ) Sono disponibili anche i dati sui prodotti del metabolismo di T. spira lis con un effetto inibitorio sulla crescita e sulla sopravvivenza delle cellule tumorali in vitro (Vasilev S. et al., 2015; Wang X. L. et al., 2009; Wang X. L. et al., 2013).

Non sono stati condotti studi per valutare l'attività antitumorale di T. canis o i prodotti metabolici di questi elminti.

Lo scopo dell'invenzione è quello di ottenere estratti proteici da tessuti T. canis, valutazione dei loro effetti antiproliferativi su modelli di cellule tumorali di varie linee e garantire il loro possibile utilizzo in futuro come un efficace agente antitumorale.

L'essenza dell'invenzione risiede nel fatto che l'agente con attività antiproliferativa è un estratto proteico di elminti, in particolare l'estratto di Toxocara canis. Va notato che le condizioni per ottenere un estratto dall'omogenato di elminti, compreso T. canis, dipendono dal materiale biologico utilizzato, e le caratteristiche essenziali dell'ottenimento di estratti proteici sono l'estrazione con tampone fosfato-salino con pH = 7,2.

L'estratto ha un marcato effetto antiproliferativo e citostatico sui modelli di cellule tumorali umane in vitro. Come accennato in precedenza, l'estratto di toxocar non è stato precedentemente testato su modelli di cellule tumorali umane in vitro.

A causa dell'origine naturale dell'agente antiproliferativo proposto può essere meno tossico in presenza di un'elevata efficacia antitumorale di un ampio spettro di azione.

Esempi di prestazioni specifiche

Esempio 1. Preparazione dell'estratto di proteine ​​T. canis.

Come mezzo, presumibilmente con attività antiproliferativa, ha usato l'estratto proteico da T. canis maturo, pre-purificato da composti a basso peso molecolare.

Lavato accuratamente con acqua distillata, quindi con una soluzione fisiologica, vermi freschi congelati sessualmente maturi - Toxocara canis sono stati sottoposti a frantumazione a forbice, omogeneizzazione in una malta di porcellana posta in un piatto con ghiaccio. Nel processo di omogeneizzazione, il biomateriale risultante è stato sottoposto a più cicli di congelamento e scongelamento (3-5 volte) con la macinazione simultanea per distruggere completamente la struttura della materia prima al fine di ottenere una massa omogenea omogenea. Come estrattore di proteine ​​dall'omogenato ottenuto di T. canis, è stata utilizzata una soluzione tampone fosfato-salina pH 7,2, che è stata preparata secondo la ricetta (cloruro di sodio, 8,5 g, fosfato di sodio disostituito 1,15 g, potassio acido mono-fosforico, 0, 2 g in 1 l di acqua distillata) nel rapporto di 1:10. L'estrazione è stata eseguita in condizioni refrigerate a + 4 ° C per 48 ore con agitazione costante su un agitatore magnetico. Dopo il tempo di estrazione, il biomateriale risultante è stato centrifugato a 15.000 rpm per 20 minuti in una centrifuga refrigerata Optima TLX (centrifuga da banco controllata da un microprocessore Becman Coulter Herneshal, S.A.). L'estratto proteico da T. canis ottenuto dopo la centrifugazione è stato liberato dalle proteine ​​a basso peso molecolare mediante dialisi contro la soluzione tampone fosfato-salina diluita con acqua distillata in un rapporto di 1:10.

L'estratto proteico ottenuto è stato conservato a -20 ° C. Usando l'elettroforesi su gel di poliacrilammide, è stato determinato che l'estratto proteico da T. canis contiene più di 20 frazioni proteiche di varia mobilità elettroforetica e peso molecolare.

Esempio 2. Valutazione dell'effetto dell'estratto di proteina T. canis su colture di cellule di carcinoma mammario umano (MCF-7) e colon umano (Caco-2) a seconda della concentrazione dell'estratto.

Lo scopo di questo esperimento era di valutare l'effetto dell'estratto di proteina T. canis sulla proliferazione di cellule tumorali umane di due linee.

Materiali e metodi

Cellule bersaglio In questo lavoro sono state utilizzate due linee cellulari epiteliali: MCF-7 (adenocarcinoma del seno umano) e Caco-2 (adenocarcinoma del colon umano). Le cellule, al di fuori dell'esperimento, sono state conservate in azoto liquido. Prima di condurre gli studi, le fiale con cellule sono state scongelate e coltivate con metodi standard in flaconi di coltura (CORNING, Flask, 25 cm 2, USA) nel mezzo di crescita DMEM GlutaMAX (Gibco) con l'aggiunta di FBS al 10% e antibiotico / antimicotico (Gibco, × 100) condizioni di alta umidità2-incubatore (New Brunswick, Galaxy 170R) a T = 37 ° C in un'atmosfera del 5% di CO2.

L'estratto proteico studiato. L'estratto proteico studiato T. canis (per la preparazione, vedi esempio 1) è un estratto in soluzione salina tamponata con fosfato, non sterile. La concentrazione di proteine ​​nella soluzione madre era 10,9 mg / ml. Prima della ricerca, la soluzione è stata conservata a -70 ° C.

Prima dell'operazione, il tubo con l'estratto proteico è stato scongelato a temperatura ambiente. In un esperimento in vitro, l'estratto proteico è stato testato alle seguenti concentrazioni di proteine: 12,5, 25, 50, 100, 250, 500, 1 e 2 mg / ml. Per la preparazione delle diluizioni è stato utilizzato il mezzo di crescita DMEM GlutaMAX (DGIBCO) con FBS al 2% e antibiotico.

Prima dell'esperimento è stata preparata una soluzione di lavoro con una concentrazione di 2 mg / ml, dopo la sterilizzazione attraverso Millipore cartella ugello (0,22 μ) sono stati preparati diluendo l'estratto di T. canis: 1, 500, 250, 100, 50, 25 e 12,5 μg / ml con mezzo di crescita DMEM GlutaMAX (DGIBCO) con FBS al 2% e antibiotico.

Per l'esperimento, le cellule MCF-7 e Caco-2 sono state incubate secondo la procedura standard per ottenere un monostrato subconfluente. Nella fase di crescita attiva, il monostrato cellulare è stato disperso con una soluzione tripsina / versaen, le cellule risultanti sono state risospese in mezzo di crescita DMUD GlutaMAX (Gibco) con 10% di FBS e un antibiotico di concentrazione standard. La sospensione cellulare preparata di recente è stata seminata in piastre da 24 pozzetti (SARSTEDT, Germania) a 35 × 10 3 cellule per pozzetto per cellule MCF-7 e 30 × 10 3 cellule per pozzetto per cellule Caco-2. Successivamente, le piastre sono state collocate in CO2-incubatore per 3 ore fino a quando le cellule si estendono. Quindi, mezzo con cellule non aderenti è stato rimosso dai pozzetti e il mezzo di crescita è stato aggiunto ai pozzetti sperimentali con concentrazioni di prova della sostanza (in 4 ripetizioni per ciascuna concentrazione di prova). Come controllo, sono stati lasciati quattro pozzetti con cellule coltivate in un mezzo di crescita completo con FBS al 2% senza la sostanza in esame. Il volume finale del mezzo di crescita nei gruppi di controllo e sperimentali di 500 μl per pozzetto.

Durante l'esperimento, l'osservazione ottica della luce giornaliera delle cellule è stata effettuata utilizzando un microscopio invertito Olympus CK 40 (Giappone), valutando la presenza o l'assenza di cambiamenti nella morfologia cellulare nei pozzetti sperimentali rispetto al controllo. La risposta proliferativa delle cellule tumorali all'azione dell'estratto studiato di T. canis è stata valutata dalla densità e dalla vitalità del monostrato formato dopo incubazione di 96 ore delle cellule in presenza dell'estratto studiato.

La vitalità cellulare è stata determinata utilizzando la procedura di conteggio delle cellule standard nella camera di Goryaev con colorazione preliminare della sospensione cellulare con soluzione di trypan blue. A tal fine, il monostrato è stato disperso con una soluzione di tripsina / versus, le cellule sono state risospese nel mezzo di crescita e la sospensione di cellule preparate è stata tinta con soluzione di Trypan Blue allo 0,4% (SIGMA). Successivamente, le cellule furono contate nella camera di Goryaev. Per fare ciò, il numero totale (totale) di cellule e il numero di cellule macchiate (non vitali) sono state contate in ciascun pozzetto.

% di cellule vitali (Nbene) calcolato dalla formula

dove nt - numero totale (totale) di celle nel pozzo;

Nsu - il numero di cellule macchiate (non vitali) nel pozzetto.

L'effetto dell'estratto studiato di T. canis sull'attività proliferativa delle cellule tumorali MCF-7 e Caco-2 è stato valutato dopo 96 ore, confrontando il numero totale di cellule nei pozzetti sperimentali rispetto al controllo.

Durante l'esperimento valutare l'effetto dell'estratto prova di T. canis a concentrazioni indicate su colture epiteliali di cellule mammarie umane tumorali (MCF-7) e del colon umano (Caco-2) è stato effettuato il controllo visivo giornaliero sulla natura della crescita e la morfologia delle crescenti colonie di cellule. Dopo 24 e 48 ore in tutti i pozzetti sperimentali con cellule MCF-7 e Caco-2, la densità delle colonie è paragonabile al controllo. Non sono stati trovati cambiamenti morfologici Detritus era completamente assente.

Dopo 72 ore, è stato osservato un significativo ritardo di crescita nelle cellule MCF-7 e Caco-2 a una concentrazione di 2 mg / ml. È stato osservato che nei pozzetti sperimentali a 2 mg / ml la dimensione delle colonie era inferiore rispetto al gruppo di controllo; anche nel campo visivo, il numero di cellule divisorie mitotiche è notevolmente diminuito e non sono stati osservati cambiamenti morfologici. Nei pozzetti delle cellule MCF-7 e Caco-2 a 1 e 500 μg / ml, è stato osservato un leggero ritardo di crescita rispetto al controllo. Nei pozzetti sperimentali con una concentrazione di 12,5, 25, 50 e 250 μg / ml, non sono state riscontrate differenze rispetto al gruppo di controllo K.

Dopo 96 ore di coltivazione in cellule MCF-7 e Caco-2 a concentrazioni di 2, 1 e 500 μg / ml, sono state osservate un numero significativamente inferiore di colonie proliferanti nel campo visivo, con un numero inferiore di cellule rispetto a quelle del gruppo di controllo. I cambiamenti morfologici sono stati osservati nelle cellule MCF-7 solo a una concentrazione massima di 2 mg / ml. In questo gruppo sperimentale sono state osservate singole colonie in cui sono state osservate cellule senza contorni distinti e pronunciati con una perdita di pattern caratteristici. Il numero di celle divisorie mitotiche nel campo visivo è ridotto. In questo caso, i detriti nell'ambiente erano assenti.

Dopo che l'esperimento è stato completato, dopo 96 ore, le cellule sono state tripsinizzate, la sospensione cellulare risultante è stata tinta con una soluzione di trypan blu allo 0,4% e il numero di cellule è stato contato in una camera di Goryaev. I risultati del conteggio delle celle sono presentati nella tabella 1.

Dai dati presentati nella tabella 1, ne consegue che l'estratto studiato di T. canis non ha influenzato significativamente il numero di cellule Caco-2 vitali dopo 96 ore di incubazione. Pertanto, a concentrazioni di 2, 1 e 500 μg / ml, il numero di cellule vitali del colon umano era 90,0, 88,5 e 88%, che è paragonabile al gruppo di controllo delle cellule, dove la vitalità è del 96%. Allo stesso tempo, con gli stessi valori di concentrazione, è stata osservata una diminuzione significativa del numero totale di cellule rispetto al gruppo di controllo. Pertanto, il numero totale di cellule Caco-2 nel gruppo di controllo dopo 96 ore di coltivazione era 116,7 × 10 3 cellule / pozzetto e a 500, 1 e 2 mg / ml erano 72,0 × 10 3, 63,3 × 10 3 e 65,9 × 10 3 celle / pozzetto, rispettivamente. A concentrazioni di estratto da 12,5 a 250 μg / ml, il numero totale di cellule è paragonabile al gruppo di controllo e varia da 94,0 × 10 3 a 106,0 × 10 3 cellule / pozzetto. Sulla base di ciò, si può concludere che alte concentrazioni di T. canis estrarre da 500 a 2 mg / ml inibiscono l'attività proliferativa delle cellule tumorali Caco-2.

Confrontando i risultati ottenuti (Tabella 1) sull'effetto dell'estratto di T. canis sulla coltura di cellule di tumore umano del colon umano e del colon, si può presumere che le cellule MCF-7 siano più sensibili all'effetto negativo della sostanza in esame. Pertanto, dai dati della tabella 1 risulta che il numero di cellule MCF-7 vitali è diminuito gradualmente dal 95,2% con una dose minima del 12,5 al 79,5% con un valore massimo di 2 mg / ml, rispetto a un valore di controllo di 96,8 %. Un leggero effetto inibitorio dell'estratto prova sulla attività proliferativa delle cellule MCF-7 è manifestata già ad una concentrazione di 50 ug / ml, in cui il numero totale di cellule pari a 151,9 x 10 cellule marzo / pozzetto, in confronto con un valore di riferimento 181,3 × Marzo 10 cellule / il buco. Con un aumento della concentrazione da 100 μg / ml e superiore, l'effetto inibitorio dell'estratto è aumentato proporzionalmente alla concentrazione e ha raggiunto valori massimi a 2 mg / ml, dove il numero totale di cellule è diminuito tre volte rispetto al controllo ed era 60,0 × 10 3 cellule / pozzetto.

Sulla base dei risultati ottenuti in questo lavoro, possiamo concludere quanto segue.

1. L'estratto studiato di T. canis ha un marcato effetto antiproliferativo sulle cellule MCF-7 a concentrazioni di 100, 250, 500, 1 e 2 mg / ml, che si manifesta per 96 ore di incubazione.

2. L'effetto dell'estratto sulle cellule MCF-7 dipende dalla dose.

3. L'effetto inibitorio dell'estratto di T. canis sull'attività proliferativa della coltura delle cellule Caco-2 si manifesta in misura minore e in concentrazioni più elevate di 500, 1 e 2 mg / ml.

4. La coltura delle cellule MCF-7 è più sensibile all'effetto antiproliferativo dell'estratto di T. canis rispetto alle cellule Caco-2 in un modello in vitro dopo 96 ore di coltura.

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1. agente, hanno attività antiproliferativa, che è una proteina estratto Toxocara canis, ottenuto per estrazione elminti gomogentata T. Canis salina tamponata con fosfato a pH 7,2 in rapporto 1:10 per 36-48 ore a 4 ° C, e centrifugazione.

2. Utensile secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che ha attività antiproliferativa su modelli di cellule tumorali umane in vitro.

L'effetto antiproliferativo è

Alcune funzioni sono alla base dell'azione antiproliferativa degli interferoni. La maggior parte dei componenti dell'attività anti-infettiva dell'interferone gioca un ruolo nel loro effetto antitumorale.

Citati aumento della sintesi Mx-proteine, sono inibitori di enzimi mRNA trascrizione sistema sintetasi 2'-5'-oligoadenylate, inibendo la traduzione richiesto per la sintesi delle proteine ​​cellulari, deplezione di triptofano di depositi intracellulari, con conseguente interruzione della sintesi proteica in una cellula, sono di grande importanza nella antiproliferativo, compreso antitumorale, azione di interferone.

livello di significatività cambia 2'-5 'sintetasi azione antiproliferativa di IFN-a osservazioni cliniche convalidati: indica il grado di correlazione con livello crescente di terapia enzimatica è efficace in pazienti con carcinoide intestinale e linfomi.

Non meno significativo nell'azione antiproliferativa dell'interferone è un altro meccanismo. Il segnale trasmesso al nucleo cellulare legando l'interferone al recettore dell'interferone riduce l'espressione di proto-oncogeni, in particolare c-tus e c-fos, coinvolti nella regolazione della crescita cellulare.

La soppressione dell'attività di questi proto-oncogeni porta al blocco del ciclo cellulare, all'accumulo di cellule nella fase G0, con il risultato che la proliferazione rallenta o addirittura si ferma, poiché la maggior parte delle cellule subisce l'apoptosi. Questo processo è reversibile, e qualche tempo dopo la rimozione dell'interferone, la proliferazione cellulare può recuperare alla stessa velocità, mentre l'espressione di oncogeni, soppressa in presenza di interferone, dopo la sua rimozione dal corpo può anche recuperare allo stesso livello.

Allo stesso modo, l'effetto degli interferoni nella maggior parte dei casi non causa processi irreversibili nelle cellule, il cui genotipo viene modificato sotto l'influenza dell'integrazione del genoma del virus nel DNA della cellula. L'uso prolungato di interferone in questi casi può ripristinare il normale fenotipo cellulare, ma la cessazione dell'azione di interferone porta nuovamente allo sviluppo di un tumore.

L'inibizione dell'angiogenesi, della crescita vascolare e delle neoplasie, che svolge un ruolo importante nella crescita e nella metastasi del tumore, è importante nell'antiproliferativo, in particolare, nell'antitumore, nell'azione degli interferoni. Numerosi studi sul meccanismo dell'azione terapeutica dell'IFN-a nell'animomatomatosi hanno dimostrato che gli interferoni inibiscono la proliferazione delle cellule endoteliali e delle cellule muscolari lisce, inibiscono il fattore di crescita dei fibroblasti e l'angiogenina (fattore di crescita vascolare e neoplasie), riducono la produzione di collagene.

È stato dimostrato che IL-12, che ha un marcato effetto anti-angiogenico, migliora la formazione di IFN-y e la sua proteina effettrice p10.

Sulle colture cellulari di donatori sani e pazienti con leucemia acuta, è stato dimostrato che l'IFN-a inibisce significativamente l'attività della telomerasi, l'enzima che regola la lunghezza dei telomeri necessari per la divisione cellulare. Ci sono prove ripetutamente confermate che l'IFN-y aumenta l'espressione dell'antigene FAS e della caspasi 3 e quindi induce l'apoptosi nei progenitori del midollo osseo (CD34 +).

Vi sono prove che l'IFN-a agisce in modo simile e l'effetto del suo effetto apoptotico è potenziato dalla frammentazione della molecola anti-apoptotica di Bax causata da esso. L'IFN-a migliora anche il rilascio nel sangue del fattore di necrosi tumorale, che è mirato alla degradazione delle cellule tumorali.

Pertanto, dai dati disponibili fino ad oggi, è ovvio che gli interferoni hanno un'azione antiproliferativa, inclusa antitumorale, attuata in diversi modi, spesso correlati. Nell'effetto antitumorale degli interferoni, sono importanti sia i metodi descritti di effetti diretti sul tumore e i meccanismi antitumorali indiretti associati ad un aumento dell'attività dei macrofagi, l'attivazione di cellule T, i killer naturali e un aumento della produzione di anticorpi.

L'effetto antiproliferativo è

Istituto di Epidemiologia e Microbiologia. NF Gamalei RAMS, Mosca

Effetto antiproliferativo

Altamente sensibile all'effetto AP delle cellule tumorali, caratterizzato da una crescita continua incontrollata, quindi l'effetto AP ha dato speranza per l'attività antitumorale dell'IFN. Molte centinaia di ricercatori si sono impegnati nello studio di questo problema, spesso combinando questi due concetti, che è clinicamente sbagliato.

Quando si utilizza l'IFN in dosi elevate (> 1 milione di UI), l'effetto AP è espresso principalmente nella citopenia. Le cellule del sistema ematopoietico sono altamente sensibili all'IFN. Questo inibisce sia la crescita che la capacità di colonizzare nel midollo osseo e nella milza. Anche la riproduzione dei linfociti stimolati con mitogeni è soppressa. Di norma, la serie linfoide è più sensibile all'IFN che mieloide. Il meno suscettibile all'azione dell'eritropoiesi di interferone.

Allo stesso tempo, l'IFN applicato in dosi giornaliere elevate (3-15 milioni di UI) causava la citoriduzione (diminuzione del numero di leucociti tumorali circolanti) in media da 97,4x10 9 a 4,2x10 9 / l con una diminuzione della dimensione della milza [28] nei pazienti leucemia mieloide cronica. L'effetto dipendeva dalle dosi applicate del farmaco (cioè, ottenuto grazie all'effetto AP), ma erano necessarie ulteriori misure per ottenere l'effetto antitumorale e la cura, incluso il trapianto di midollo osseo.

L'effetto AP è reversibile. Dopo aver interrotto l'introduzione dell'ematopoiesi IFN è completamente ripristinato. Riprende anche la crescita delle cellule tumorali. Per mantenere l'effetto AP nel corpo richiede l'introduzione costante di alte dosi di IFN.

L'effetto AP è sicuramente associato all'attivazione della sintetasi 2 ', 5'-oligo (A), poiché in culture diverse esiste un parallelismo tra il livello di 2', 5'-oligoadenilati nel citoplasma e il grado di soppressione della proliferazione. Questa relazione non è ancora chiara. Una cosa è senza dubbio che i meccanismi molecolari dello sviluppo degli stati AB e AP nelle fasi successive sembrano essere diversi. Ad esempio, la tossina del colera, cambiando lo stato fisico-chimico della membrana citoplasmatica e il livello di cAMP, inibisce lo sviluppo dello stato AV, ma non l'effetto AP [29]. L'azione simile ha oubain, puromycin e cycloheximide in determinate concentrazioni.

Le cellule del tessuto cutaneo-muscolare, mesenchimale e epiteliale del corpo sono generalmente resistenti all'azione AP dell'IFN. Il modello più sensibile utilizzato per misurare l'effetto di AP è considerato come linfociti di Dahlina B isolati da pazienti con linfoma di Burkitt. In un'analisi retrospettiva, possiamo concludere che, per potenziale antiproliferativo, il più attivo è IFN-α. È spesso 10-20 volte più efficace di IFN-α. L'attività di IFN- e IFN- varia a seconda del tipo di cellule, ma più spesso l'IFN- ha vantaggi per le cellule del tessuto muscolare della pelle. Per quanto riguarda il potenziale antiproliferativo, la seguente riga di IFN è valida: IFN-> IFN-> IFN-. Va ricordato che l'effetto AP è intrinseco a tutti gli IFN e si manifesta sempre clinicamente se usato in dosi elevate. Poiché la sindrome clinica è di solito citopenia reversibile, è consigliabile utilizzare l'IFN in dosi giornaliere di> 1 milione di UI con attivatori ematopoietici, ad esempio con leucemia.

L'effetto AP si manifesta solo nell'interazione dell'IFN con specifici recettori, seguita da una profonda violazione della sintesi di macromolecole. I mutanti cellulari che hanno perso il loro recettore diventano resistenti ad entrambi gli effetti antivirali e antiproliferativi. Va inoltre tenuto presente che l'effetto antiproliferativo a basse dosi è di natura citostatica: la crescita cellulare viene completamente ripristinata dopo la rimozione di IFN, anche se questo richiede tempo - almeno 24 ore [30, 31].

Una revisione di numerose osservazioni [32] ha portato alla conclusione che l'effetto antiproliferativo dell'IFN è particolarmente pronunciato durante il periodo di gap preparatorio (fase G0, sol1, sol2), quindi, le cellule in cui questo periodo è breve, e la sintesi del DNA (periodo S) è intensa, o sono nella fase della mitosi (fase M), sono meno sensibili.

È noto che esiste un livello base di 2 ', 5'-oligoadenilato nel citoplasma, che è necessario per la proliferazione. Tuttavia, con l'introduzione dell'IFN nella maggior parte dei tessuti, il loro livello può aumentare di 10-15 volte. Così, nei topi che hanno ricevuto IFN- /, il livello di 2 ', 5'-oligoadenilati nella milza, nei polmoni, nel fegato e, in misura minore, nel timo e nel cervello inizia ad aumentare in 2-5 ore [33]. In questo caso, ad esempio, nuove proteine ​​con masse molecolari di 15, 16, 20, 53, 79, 87 e 105 kDa compaiono nel citoplasma di Daudi e il livello di una sola proteina diminuisce - 23 kDa. Nelle cellule mutanti resistenti all'azione AP della stessa linea, solo una proteina, 15 kDa, non è chiaramente indotta. Il livello di altre proteine ​​è significativamente ridotto, ma sono ancora rilevati. Allo stesso tempo, l'espressione del proto-oncogene cellulare c-myc è stata soppressa anche da IFN [34].

Ad oggi, è noto che nel genoma umano esistono circa 40 proto-oncogeni cellulari espressi solo in cellule embrionali, ma a bassa attività in quelli maturi. Secondo i dati pubblicati, ad esempio, nella rana speronata nel processo di maturazione dell'uovo in ciascuno di essi si accumulano fino a 8 milioni di copie del gene c-myc, nello stadio di spawn maturo, il loro livello rimane anche molto alto - 5 milioni di copie, ma poi dopo la fecondazione vengono distribuite durante la divisione e ogni cellula di girino contiene già solo 20-50 copie di c-myc, vale a dire all'incirca come una persona.

Nel genoma umano, il c-myc è poco espresso nelle cellule mature. Tuttavia, nell'embriogenesi, così come durante le operazioni chirurgiche, i processi di riparazione e rigenerazione di un'altra genesi, si verificano c-myc e altri oncogeni di crescita c-ras e c-abl. Questi proto-oncogeni sono assolutamente necessari per l'inizio della proliferazione. L'attivazione di proto-oncogeni stimola le cellule a passare dalla fase G0/ G1 alle fasi successive del ciclo cellulare - S, G2 e mitosi (M). Tuttavia, la crescita del tessuto è determinata geneticamente e strettamente controllata con la partecipazione di fattori di crescita, inibizione da contatto e fattori di apoptosi [22]. Il principale regolatore dell'espressione di proto-oncogeni di crescita è la proteina p53, il cui gene è ampiamente rappresentato nel genoma dei mammiferi.

Nelle cellule del sistema ematopoietico, l'espressione del gene p53 porta ad un fenomeno fisiologico - morte programmata - apoptosi. Previene questo gene della proteina bcl-2. Pertanto, un aumento nell'espressione dei proto-oncogeni della crescita crea le condizioni per la crescita incontrollata e la malignità (specialmente con mutazioni puntiformi che trasformano il proto-oncogene in un oncogene, o quando è incorporato nel genoma virale e influenzato da un potenziatore virale). La diminuzione della loro espressione sotto l'azione di IFN o p53 (anche la proteina Rb è coinvolta, che qui non viene considerata) inibisce la crescita e la proliferazione. Ma, naturalmente, questi processi non sono limitati a, infatti, sono molto più complicati.

Alla trasformazione del tumore, dovrebbe verificarsi l'attivazione di c-myc e altri oncogeni di crescita. È interessante notare che per mantenere il fenotipo trasformato è necessaria l'espressione costante degli oncogeni e la conseguente presenza di oncoproteine ​​nel citoplasma. L'introduzione di oncoproteine ​​in una cellula normale porta alla comparsa di segni fenotipici di trasformazione, che iniziano a scomparire quando le oncoproteine ​​si degradano. L'introduzione di anticorpi contro le oncoproteine ​​nel citoplasma delle cellule trasformate porta anche a un restauro temporaneo di cellule fenotipicamente normali. Quindi, una cellula trasformata che ha perso le sue funzioni specifiche (differenziazione) ed è caratterizzata da crescita incontrollata, mentre sopprime l'espressione di oncogeni di crescita sotto l'influenza di IFN, può essere restituita alla norma fenotipica. È estremamente importante conoscere ogni dottore.

Esistono diversi modi per attivare proto-oncogeni cellulari - mutazioni puntiformi, amplificazione genomica, accumulo di trascritti o, infine, traslocazione genica, descritti per la leucemia mieloide cronica (gene c-abl 9:22) o linfoma di Burkitt (gene c-myc 8:14) [35]. Il gene traslocato è influenzato dal nuovo promotore e può essere attivato. I virus oncogeni che trasportano questi oncogeni (di solito con modifiche minori) e in grado di integrarli nel genoma possono svolgere un ruolo importante. Tuttavia, non vi è dubbio che le mutazioni puntiformi nel gene p53, che si trovano in almeno il 50% delle cellule tumorali caratteristiche degli Stati Uniti e dell'Inghilterra, sono più probabili per i tumori umani [36]. Si presume che il fatto della mutazione del gene p53, che riduce il controllo sull'attività degli oncogeni di crescita, crei solo le condizioni per la crescita del tumore. Le loro manifestazioni cliniche dovrebbero essere previste nell'intervallo fino a 30 anni, quando vengono attivati ​​altri segnali o si indeboliscono i meccanismi di immunità antitumorale.

La capacità dell'IFN di prevenire i processi antitumorali è innegabile, se non altro attraverso l'effetto sull'espressione di oncogeni di crescita. Ma non sono affatto studiati.

Utilizzando l'esempio del gene c-myc nelle cellule Daudi per la prima volta nel 1984, è stato dimostrato che l'IFN di tipo I può essere considerato un regolatore negativo dell'espressione di oncogeni di crescita, che almeno parzialmente spiega l'effetto di AP nei tessuti normali [37]. Successivamente, questo effetto è stato osservato anche con un altro oncogene da crescita c-Ha-ras. L'effetto è più spesso realizzato a livello di traduzione oncogenica (livello proteico). Usando l'esempio c-myc, è stato dimostrato che la proteina legante il DNA p62 kDa, che è un prodotto di c-myc, è necessaria per la legatura di frammenti di DNA di Okazaki in una singola elica. La sua soppressione con l'introduzione dell'IFN impedisce la sintesi di nuovo DNA, seguito dall'inibizione della proliferazione.

Tuttavia, ci sono altri esempi di inibizione della replicazione senza un pronunciato effetto sull'espressione di proto-oncogeni di crescita (cellule della serie di monociti I-937, HL-60, erythroleukemia di Amico, Balb c / 3T3). Il sistema di 2 ', 5'-oligo (A) sintetasi-RNasi L può svolgere un ruolo importante in questo processo, assicurando il rapido degrado dell'mRNA recentemente sintetizzato richiesto per la proliferazione [38].

Effetti immunomodulatori

Per quasi un intero decennio, i preparati di IFN sono stati usati come agenti antivirali in grado di proteggere la cellula dall'infezione virale senza la partecipazione di difensori immunitari. Sebbene già allora un certo numero di osservazioni cliniche, per esempio, la stimolazione dei processi riparativi nelle ferite, compresi quelli altamente infetti [39, 40], e le ustioni estese [41] non rientrassero nello schema generale e necessitavano di un nuovo modo di pensare [2].

Grande interesse è stato attratto da uno studio condotto presso il Primate Center in Olanda, che ha dimostrato che le scimmie infettate con un ceppo di virus vaccinico altamente sensibile o il suo mutante, resistente all'IFN, che non è praticamente realizzabile nell'organismo (> 10 mila UI), con conseguente Nel trattamento dell'IFN, non c'erano differenze significative nelle dinamiche cliniche e nell'intensità dell'immunità sviluppata. In entrambi i casi, l'IFN ha prevenuto il danno virale. Ciò indicava il ruolo predominante degli immunoprotettori attivati ​​dall'IFN nei processi di eliminazione del virus e il successivo recupero clinico.

Dal punto di vista di oggi, si può sostenere che l'attivazione di risposte immunitarie cellulari aspecifiche e la regolazione degli effettori nella risposta immunitaria, apparentemente, è la funzione principale dell'IFN nel corpo [4]. Quando interagiscono con il patogeno, gli IFN sono prodotti da macrofagi e linfociti, si verifica una reazione infiammatoria, che porta alla distruzione del patogeno nel fuoco con danni minimi ai tessuti normali. È noto che la salute normale è supportata principalmente da reazioni di immunità cellulare aspecifiche effettuate dalla triade nota di immunodeficienti: macrofagi, linfociti T-helper e fagociti neutrofili. Il macrofago in questo caso è considerato come una cellula universale presentante l'antigene (APC), che presenta l'antigene processato al linfocita T, insieme con l'attivazione delle citochine. Il ruolo dell'AIC è anche svolto da cellule dendritiche e cellule di Langerhans (pelle). Ma l'essenza del fenomeno non cambia. L'AIC impone un antigene processato in complesso con il complesso principale di istocompatibilità (MHC) di classe 2 (antigeni virali e tumorali in complesso con MHC di classe 1), che deve essere riconosciuto dal recettore delle cellule T (TCR) dei linfociti SD3 +. È noto che l'immunogenicità dell'antigene processato aumenta di circa 10.000 volte e 100 complessi di antigene di classe 2 + MHC sono in grado di interagire con 18.000 TCR [42]. Questo caratterizza l'efficacia del riconoscimento immunitario.

Il ruolo di un antigene può essere eseguito da qualsiasi agente patogeno, che viene prima ucciso dalle reazioni di uccisione di perossido, quindi interiorizzato. Le reazioni di risposta non specifiche successive sono mostrate in Fig. 1. Sotto l'azione dell'antigene, il macrofago deve essere attivato, producendo l'autocrina INF-a e IL-6. Gli antigeni MHC di classe 2 non sono costantemente espressi sul macrofago e il loro aspetto è stimolato da IFN-α e IL-4. Il processo è soppresso dal fattore di crescita trasformante TGF-α, che può anche essere prodotto dai macrofagi. La fonte dell'IFN sono sempre i linfociti T attivati.

Il contatto diretto del macrofago e del linfocita T-helper, che viene effettuato attraverso le strutture dell'antigene di classe 2 + MHC e TCR, è anche completato dalle glicoproteine ​​transmembrana ICAM. Ciò fornisce una restrizione della risposta immunitaria, ma non è sufficiente per attivare i linfociti T. Un secondo segnale è necessario sotto forma di un complesso di citochine prodotte da macrofagi attivati: questi sono principalmente IFN-a, così come IL-1, IL-6, IL-12, TNF-α, che interagiscono con il corrispondente recettore sulla cellula T-helper.

Linfocita T-helper attivato, che sostiene i macrofagi, rilascia citochine come IFN- (stimolando l'espressione di MHC di classe 2) e IL-4 (attiva i geni di classe 1 MHC), MIF e LIF che trattengono i macrofagi nella fonte di infiammazione e stimolazione delle colonie fattori (CSF) - M-CSF e GM-CSF. A causa dell'effetto mutualmente bilanciato dei macrofagi attivati ​​e dei linfociti T-helper, il loro stato di attivazione viene mantenuto e l'amplificazione della risposta immunitaria viene ottenuta accelerando la differenziazione dei macrofagi dai precursori dei monociti / macrofagi.

I segnali di attivazione da macrofagi (IFN-, IL-1, TNF-α, IL-8, G-CSF e GM-CSF) e linfociti T-helper (IFN-, IL-3) sono percepiti da fagociti neutrofili, contribuendo alla loro differenziazione e stimolazione fagocitica la funzione. Ciò aumenta tutti i parametri della fagocitosi: il numero di neutrofili segmentati maturi, la generazione di perossidi, l'indice fagocitico e il numero e anche (soprattutto) il completamento della fagocitosi. Possiamo dire che questo cerchio si chiude.

Il principale segnale negativo per l'intero sistema è IL-10, che può essere prodotto sia da macrofagi sia da linfociti T. Ma il ruolo regolatore principale in questo processo appartiene, apparentemente, a T-linfociti. Anticorpi specifici non possono partecipare a queste reazioni.

L'intera serie di reazioni di eliminazione dell'antigene cellulare che coinvolgono macrofagi (o altri APC), linfociti T e fagociti neutrofili, in cui non è necessaria la proliferazione e la differenziazione dei linfociti T, può essere considerata la prima fase della risposta immunitaria. È strettamente correlata alla seguente: la seconda fase, che inizia al livello dei linfociti T proliferanti e determina la direzione principale nelle successive reazioni dell'organismo all'agente patogeno, quando le vie cellulari (o, in particolare, HRT) o umorali dell'immunogenesi iniziano ad accendersi.

La prima fase della risposta immunitaria è costantemente funzionante ed è, apparentemente, la principale risposta immediata del corpo con bassi carichi di agenti patogeni. Si accende immediatamente dopo il riconoscimento dell'antigene. I suoi partecipanti sono immunodeficienti che sono differenziati da questo momento, ma, d'altra parte, è lei che crea la base per le successive reazioni immunitarie. Il ruolo protettivo delle reazioni della prima fase della risposta immunitaria è estremamente alto e sembra essere sottostimato dal medico.

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AN Mosè, Ph.D. vet. Sciences, LLC "BIOTECH-FARM", San Pietroburgo

PI Baryshnikov, Dr. bagnato. Scienze, Professore, Altai AGAU, Barnaul

La famiglia delle citochine comprende interferoni (in seguito chiamati IFN), interleuchine, chemochine, fattori di crescita e stimolazione delle colonie, che segnalano le molecole polipeptidiche del sistema immunitario. Possedendo un ampio spettro di attività biologica, determinano non solo un livello adeguato della risposta immunitaria, ma regolano anche l'interazione dei principali sistemi integrativi del corpo - il nervoso, il sistema immunitario e il sistema endocrino.

La struttura e il meccanismo d'azione della maggior parte delle citochine sono abbastanza caratterizzati. A causa dell'uso di metodi di ingegneria genetica e di moderna biotecnologia, molte citochine sono attualmente prodotte sotto forma di preparati ricombinanti identici a molecole endogene, in quantità sufficiente per il loro uso clinico.

Molti microrganismi - batteri, lieviti, virus - sono usati come recipienti di materiale genetico estraneo per ottenere ceppi ricombinanti - produttori di prodotti biotecnologici. Così ottenuto ceppi ricombinanti di E. coli, producendo interferoni, insulina, ormoni della crescita, una varietà di antigeni; ceppi di B. subtilis che producono interferone; lievito producendo interleuchine, ecc.

L'uso di citochine ricombinanti, fornendo una correzione medica adeguata e mirata delle disfunzioni immunitarie, aumenta l'efficacia dell'immunoterapia e del trattamento in generale. Le citochine introdotte nel corpo compensano la carenza di molecole regolatrici endogene e ne riproducono completamente gli effetti. Ciò è particolarmente importante in condizioni di patologia grave o cronica, quando l'uso di immunomodulatori tradizionali o induttori della sintesi di citochine è inutile a causa dell'esaurimento delle capacità compensative del sistema immunitario. Attualmente, la terapia con citochine ricombinanti è una delle aree più promettenti e in continua espansione di immunofarmacologia.

Quindi, gli effetti antivirali e antiproliferativi hanno interferoni del primo tipo (in seguito - IFN-α, IFN-β). Un posto speciale alla luce delle idee moderne sui meccanismi molecolari delle risposte immunitarie appartiene all'interferone gamma (qui di seguito - IFN-γ) - la citochina regolatrice della risposta immunitaria.

Sulla base di interferoni ricombinanti, varie aziende hanno sviluppato farmaci per animali e umani, che sono usati per trattare e prevenire le malattie infettive, principalmente l'eziologia virale.

L'IFN ricombinante nel corpo di animali e umani nel trattamento e nella prevenzione di malattie di varia eziologia fornisce una correzione medica adeguata e mirata delle disfunzioni immunitarie, reintegrando la deficienza di molecole regolatrici endogene e riproducendone pienamente gli effetti. L'alta efficienza immunocorrettiva, la prevedibilità e la selettività della loro azione sono dovute alla presenza di specifici recettori sulle cellule e all'esistenza di meccanismi naturali per la loro eliminazione. I preparati farmaceutici a base di IFN ricombinante sono potenti agenti della terapia patogenetica immuno-orientata e hanno sia un effetto di sostituzione diretta che vari effetti induttivi. Attualmente, sono ampiamente utilizzati nel trattamento di malattie infettive, oncologiche e di alcuni altri animali.

Classificazione di interferone

Interferoni (IFN, IFN) è il nome comune sotto il quale attualmente uniscono un certo numero di proteine ​​biologicamente attive o glicoproteine ​​con proprietà simili sintetizzate dalle cellule del corpo durante una reazione protettiva in risposta all'invasione di agenti estranei - un'infezione virale o effetto antigenico. Grazie agli interferoni, le cellule diventano immuni al virus.

Gli interferoni sono una famiglia multigenica di citochine inducibili con diverse funzioni, tra cui antivirale, antiproliferativa, antitumorale e immunomodulante.

Attualmente sono noti più di 20 IFN, diversi per struttura, proprietà biologiche e meccanismo d'azione predominante. L'IFN è diviso in tre tipi:

• Il tipo I, noto come interferone virale, comprende IFN-α (leucociti, sintetizzati da monociti attivati ​​e linfociti B), IFN-β (fibroblastici, sintetizzati da fibroblasti, cellule epiteliali e macrofagi) e altri IFN. Il primo tipo (IFN-α, IFN-β) è principalmente caratterizzato da effetti antivirali e anti-proliferativi e, in misura minore, da effetti immunomodulatori. Vengono prodotti direttamente dopo un incontro con l'agente patogeno - sono indotti nel processo di infezione virale, la loro azione è volta a localizzare l'agente patogeno e prevenirne la diffusione nel corpo. Gli induttori IFN-α e -β sono virus, RNA (specialmente a doppio filamento), lipopolisaccaridi (LPS), componenti di alcuni batteri. Tra i virus, i più forti induttori di interferone sono l'RNA genomico. I virus del DNA sono induttori deboli (ad eccezione dei poxvirus).

• Il tipo II, noto come immune, include IFN-γ (sintetizzato da linfociti T attivati ​​e cellule NK). L'effetto principale degli interferoni del secondo tipo (IFN-γ) è la partecipazione alle reazioni immunitarie. Inizia a essere prodotta nelle fasi successive del processo infettivo da linfociti T già sensibilizzati e partecipa attivamente alla cascata di una specifica risposta immunitaria. Sostanze interferonogeniche, antigeni, mitogeni T e alcune citochine sono in grado di indurre la produzione di IFN-γ. Le cellule bersaglio per IFN-γ sono macrofagi, neutrofili, cellule natural killer, linfociti T citotossici, che hanno recettori sulla loro superficie per IFN-γ.La produzione di IFN-γ è sotto il controllo delle citochine. IL-12 e IL-18 migliorano la sua espressione e IL-2 contribuisce alla funzione dei linfociti CD4 +, attivando la produzione di IFN-γ. La quantità di fondo di IFN-γ è sempre presente nel corpo, anche se non c'è infezione: ad esempio, l'analisi dello stato dell'interferone mostra in persone sane e animali sempre una quantità definibile di IFN nel sangue, quando stimolata o infetta, aumenta molte volte. Tuttavia, durante l'infezione da herpes e nelle fasi finali del processo tumorale, la quantità di IFN-γ tende a zero, poiché il virus dell'herpes e le cellule tumorali producono proteine ​​che bloccano la sintesi di IFN-γ. Pertanto, con l'infezione da virus dell'herpes e il cancro, gli induttori di interferone sono privi di significato, devono essere introdotti nel corpo dall'esterno.

• Il tipo III è stato scoperto in seguito su tipo I e tipo II; informazioni su di esso suggeriscono l'importanza dell'IFN tipo III in alcuni tipi di infezioni virali.

Interferoni virali (IFN-α / β) sono indotti durante l'infezione virale e la sintesi di interferoni di tipo II (IFN-γ) è indotta da stimoli mitogeni o antigenici. La maggior parte dei tipi di cellule infettate da virus sono in grado di sintetizzare l'IFN-α / β nella coltura cellulare. Al contrario, l'IFN-γ viene sintetizzato solo da alcune cellule del sistema immunitario, comprese le cellule natural killer (NK), le cellule T CD4 e le cellule soppressorie citotossiche CDS.

Effetto antivirale dell'interferone

Gli interferoni non agiscono direttamente sul virus. Sotto la loro influenza, la cellula diventa resistente alle infezioni. Gli interferoni sono la prima linea di difesa contro un'infezione virale, poiché iniziano a essere prodotti immediatamente dopo il contatto con il virus. Allo stesso tempo, la gravità della risposta è direttamente proporzionale alla dose infettante.

Alcuni virus possono bloccare l'effetto antivirale di IFN. Ad esempio, gli adenovirus producono RNA specifico, che impedisce l'attivazione della protein chinasi.

Il legame dell'IFN al recettore induce tre processi simultanei nella cellula, che terminano:

• attivazione dell'endoribonucleasi latente, che porta alla distruzione dell'RNA virale;

• soppressione della sintesi dell'RNA messaggero virale;

• soppressione della sintesi proteica dell'involucro virale.

Questi meccanismi implementano integralmente l'effetto antivirale, portando alla soppressione della replicazione virale.

Effetti immunomodulatori dell'interferone

Gli IFN hanno non solo effetti antivirali, ma anche immunomodulatori dovuti all'effetto sull'espressione dei recettori del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC). L'IFN aumenta l'espressione di molecole MHC di 1a classe su tutti i tipi di cellule, migliorando così il riconoscimento delle cellule infette da linfociti T citotossici (CTL). Inoltre, l'IFN-γ migliora l'espressione delle molecole MHC di classe 2 su cellule presentanti l'antigene, con conseguente migliore presentazione degli antigeni virali ai linfociti CD4 + e cellule natural killer (cellule NK) attivate. Gli IFN stimolano anche la fagocitosi.

La regolazione della risposta immunitaria da parte delle citochine, inclusi gli interferoni, avviene secondo il principio del relè, l'effetto della citochina sulla cellula causa la formazione di altre citochine (cascata di citochine).

Effetto antiproliferativo dell'interferone

L'effetto antiproliferativo dell'IFN è spiegato dai seguenti meccanismi:

• attivazione di cellule citotossiche;

• aumento dell'espressione di antigeni associati al tumore;

• modulazione della produzione di anticorpi;

• inibizione dell'azione dei fattori di crescita tumorale;

• inibizione della sintesi di RNA e proteine ​​delle cellule tumorali;

• rallentamento del ciclo cellulare con transizione alla fase di riposo;

• stimolazione delle cellule tumorali a maturare;

• ripristino del controllo restrittivo sulla proliferazione;

• inibizione della formazione di nuovi vasi sanguigni nel tumore;

• biomodulazione dell'attività citostatica: un cambiamento nel metabolismo e una diminuzione della clearance;

• superamento della resistenza ai farmaci dovuta all'inibizione dei geni di resistenza multi-farmaco.

Effetto antibatterico dell'interferone

Negli ultimi anni, è stato dimostrato che l'IFN ha anche un effetto antibatterico, che si basa sulla capacità dell'IFN di indurre l'attività di determinati enzimi nella cellula interessata.

Inoltre, il ruolo antibatterico dell'IFN-γ consiste nell'attivazione di macrofagi che producono citochine proinfiammatorie, nonché forme attive di ossigeno e azoto, prostaglandine. Questi fattori contribuiscono allo sviluppo del processo infiammatorio che porta alla morte dei batteri.

Pertanto, tutti gli interferoni sono un gruppo di fattori proteici polifunzionali con un pronunciato effetto antivirale e antitumorale di vari gradi. L'IFN-α ha la più forte attività antivirale tra tutti gli interferoni e IFN-γ ha un'attività antiproliferativa più pronunciata. Tutti gli interferoni hanno un effetto immunoregolatore di varia gravità (IFN-γ ha il massimo) - aumentano l'attività di macrofagi, linfociti T e cellule NK.