Esame del sangue per tms di cosa si tratta

Diete

La spettrometria di massa tandem (TMS) è uno dei metodi moderni di analisi dei composti, che è ampiamente utilizzato per vari scopi scientifici e pratici. Questo metodo consente l'analisi di diverse centinaia di composti in tracce di materiale biologico.

Dove si applica questo metodo?

Nella pratica mondiale della salute pubblica questo metodo viene utilizzato per condurre screening di massa dei neonati per malattie metaboliche ereditarie (NBO). Nel punto di sangue essiccato, è possibile la determinazione degli amminoacidi (compresa la fenilalanina) e delle acil-carnitine. La determinazione quantitativa di queste sostanze consente di escludere diverse dozzine di malattie ereditarie appartenenti a varie classi di NBO (disturbi del metabolismo degli amminoacidi, acidi organici e difetti della β-ossidazione mitocondriale degli acidi grassi). Secondo i dati della letteratura straniera, la loro frequenza totale è di 1: 2.000 neonati vivi. Precedentemente, la diagnosi di questi disturbi richiedeva una grande quantità di materiale biologico, diversi studi (analisi degli amminoacidi, gas cromatografia / spettrometria di massa, determinazione dello spettro delle acilcarnitine), che richiedevano notevoli costi di tempo e di materiale. TMS ti consente di quantificare tutti questi composti in un'unica analisi!

Quali malattie possono essere rilevate utilizzando questo metodo?

Sfortunatamente, un test universale altamente sensibile e specifico per diagnosticare tutte le NBO conosciute non esiste ancora, ma le tecnologie volte ad identificare diverse dozzine e persino centinaia di malattie in un'unica analisi stanno già diventando una realtà. Questi metodi includono TMS. Questo metodo consente con elevata sicurezza di rilevare circa 40 disordini metabolici ereditari degli amminoacidi, acidi organici e difetti della beta-ossidazione mitocondriale degli acidi grassi. La maggior parte di queste malattie si verifica nel periodo neonatale. L'elenco delle malattie che possono essere diagnosticate utilizzando questa tecnologia è indicato nella sezione delle analisi http://labnbo.ru/prajs-list

Perché è necessario diagnosticare le malattie metaboliche il prima possibile?

Molti medici credono erroneamente che le NBO siano così rare che dovrebbero essere escluse solo per ultime, e molto spesso la diagnosi corretta viene stabilita già nelle fasi successive o la malattia non viene affatto diagnosticata.

Tuttavia, sono già note oltre 150 forme di NBO per le quali sono stati sviluppati metodi terapeutici efficaci e la vita e la salute di un paziente dipendono dalla rapidità e dalla correttezza della diagnosi. Per 20 malattie che possono essere diagnosticate usando TMS, è stato sviluppato un trattamento speciale. Diagnosi in tempo - vita e salute salvate del paziente!

Regole per la raccolta di campioni di sangue

Il sangue viene raccolto su una scheda filtro standard (n. 903), che viene utilizzata per schermare i neonati per PKU. Il sangue può essere capillare (di un dito, tallone) o venoso. È necessario saturare bene l'area selezionata sul filtro! La scheda filtro deve indicare chiaramente il nome, da chi e da dove sono stati inviati il ​​paziente, la data di nascita e il numero di telefono del medico curante. Il campione viene essiccato per 2-3 ore in aria. È consigliabile allegare un estratto della cronologia.

Un esempio di corretta raccolta del sangue:

Esempi di prelievi anormali del sangue:

Molti piccoli punti

Il campione non è stato completamente asciugato, a seguito del quale un campione era sfocato durante il trasporto.

La carta da filtro era sporca di sangue.

Link utili:

(NCBI) è una risorsa nazionale di informazioni sulla biologia molecolare fondata nel 1988. Il database PubMed contiene oltre 15.000.000 di articoli di varie riviste biomediche (in inglese).

Un catalogo di geni umani e malattie genetiche, creato dal Dr. V.A. McKusick e i suoi colleghi (in inglese).

(SSIEM) - Società per lo studio delle malattie metaboliche ereditarie (errori metabolici congeniti).

Istituzione scientifica di bilancio dello Stato federale "Centro di ricerca sulla genetica medica"

Portale informativo sulle malattie rare, possibilità di trattamento e diagnosi per i pazienti affetti da malattie rare

La Società tutta russa per le malattie rare è stata istituita nel 2012 per iniziativa dei pazienti, delle loro famiglie e degli esperti. Oggi, l'organizzazione OMS riunisce più di 400 pazienti provenienti da 47 regioni della Federazione Russa con 63 malattie rare.

Esame del sangue per tms di cosa si tratta

Per molti anni, lo screening è stato eseguito principalmente con test specifici per ogni singola malattia. Ad esempio, lo screening di PKU si basava su una valutazione microbiologica o chimica dell'aumento della fenilalanina.

Questa situazione è completamente cambiata negli ultimi dieci anni con l'avvento della tecnologia di spettrometria di massa tandem (TMS). Analisi di spettrometria di massa tandem (TMS) può non solo di rilevare con precisione e rapidità macchia di sangue fenilalanina elevata in un neonato con un minor numero di risposte positive falsi rispetto ai vecchi metodi, ma permette anche di rilevare contemporaneamente diverse decine di altri disturbi biochimici.

Alcuni di questi sono già stati sottoposti a screening con test individuali. Ad esempio, molti stati hanno utilizzato test specifici per la rilevazione aumentata metionina, per rilevare la spettrometria di massa tandem (TMS) era anche un metodo affidabile per determinate patologie pertinenti criteri di screening di screening-onatalnogo ma non ha avuto test affidabile precedenza.

Ad esempio, la deficienza di MCAD è una malattia dell'ossidazione degli acidi grassi, solitamente asintomatica, ma clinicamente rilevabile quando un paziente aumenta il catabolismo. La rilevazione della carenza di MCAD alla nascita può essere vitale, poiché i bambini malati presentano un rischio molto elevato di ipoglicemia pericolosa per la vita nella prima infanzia con condizioni cataboliche causate da malattie intercorrenti, come un'infezione virale.

Quasi un quarto dei bambini con deficienza di MCAD non diagnosticata muore al primo episodio di ipoglicemia. Con un trattamento adeguato, il disturbo metabolico può essere interrotto. deficit di MCAD quando lo scopo primario dello screening - avvertimento genitori e medici circa il rischio di scompenso metabolico, come i bambini tra i periodi di trattamento quotidiano quasi sani e non hanno bisogno, salvo eccezioni prolungato digiuno.

Tuttavia, l'uso della spettrometria di massa tandem (TMS) per lo screening neonatale rimane in questione. Oltre a fornire un rapido test di molti disturbi, di screening neonatale per i quali è già stato fatto o potrebbe essere giustificato, spettrometria di massa tandem (TMS) identifica anche i bambini con errori congeniti del metabolismo, come acidemia metilmalonica, di solito non sono inclusi nel programma di screening per la loro rarità e la difficoltà di fornire una terapia finale che protegge dal progressivo deterioramento neurologico.

Malattie rilevate dalla spettrometria di massa tandem

I. Aminoacidemia:
- PKU
- Malattia di urina con sciroppo d'acero
- omocistinuria
- Tsitrullinemiya
- Aciduria zuccherina arginina
- Tirosinemia tipo I

II. Acidemia organica:
- Acidemia propionica
- Acidemia metilmalonica
- Acidemia isovalerica
- 3-metil-crotonil-glycinemia isolata
- Acidemia glutarica (tipo I)
- Carenza di acetoacetil-coA-tiolasi mitocondriale
- Acidemia idrossimetilglutarica
- Il fallimento di molti coA-carbossilasi

III. Violazioni dell'ossidazione degli acidi grassi:
- Fallimento SCAD
- Carenza di idrossi scad
- Errore MCAD
- Fallimento VLCAD
- Carenza di LCAD e carenza proteica trifunzionale
- Acidemia glutarica di tipo II
- Carenza di carnitina palmitoiltransferasi II

La spettrometria di massa tandem (TMS) può anche identificare metaboliti anomali con un valore di salute indeterminato. Ad esempio, il deficit di SCAD è un'altra malattia da ossidazione degli acidi grassi, il più delle volte asintomatica, sebbene alcuni pazienti possano avere difficoltà con l'ipoglicemia episodica. Pertanto, il valore predittivo di un'analisi della spettrometria di massa tandem (TMS) positiva per SCAD sintomatico è probabilmente molto basso.

Il vantaggio di rilevare la deficienza di SCAD supera l'effetto negativo del test, che causa ansia genitoriale ingiustificata, per la maggior parte dei neonati con un risultato positivo del test che non ha mai mostrato sintomi clinici? Pertanto, non tutte le malattie rilevate dalla spettrometria di massa tandem (TMS) soddisfano i criteri per lo screening neonatale.

Ecco perché alcuni esperti del sistema sanitario sostengono che i genitori e i medici devono solo essere informati sulle deviazioni nei metaboliti con comprovati benefici clinici. Altri sostengono l'uso di tutte le informazioni fornite da spettrometria di massa tandem (TMS), e di offrire per informare medici e genitori tutti i metaboliti anormali, non importa quanto bene i criteri di malattia corrispondono a screening neonatale standard. In futuro, è possibile monitorare attentamente i pazienti con anomalie di valore sconosciuto. Per tutti questi motivi, l'uso della spettrometria di massa tandem (TMS) per lo screening dei neonati rimane oggetto di dibattito.

Per lo screening della popolazione nel periodo prenatale, vengono solitamente utilizzati due test: l'analisi cromosomica nelle donne anziane e il siero materno AFP o un triplo test per DNT e aneuploidia cromosomica.

Se la gravidanza è a rischio a causa di in - procedure invasive per la diagnosi prenatale di aneuploidie cromosomiche dovute all'età materna, dovrebbe anche offrire un controllo supplementare, ad esempio la determinazione dei livelli di AFP nel liquido amniotico, l'ibridazione genomica-comparativa per la ricerca di eliminazioni submicroscopiche pericolose, mutazioni di screening per la fibrosi cistica e altri disturbi comuni.

Esame del sangue per tms di cosa si tratta

La spettrometria di massa tandem è uno dei metodi moderni di analisi dei composti, che è ampiamente utilizzato per vari scopi scientifici e pratici. Questo metodo consente l'analisi di diverse centinaia di composti in tracce di materiale biologico. Nella pratica mondiale della salute pubblica questo metodo viene utilizzato per lo screening di massa dei neonati per malattie metaboliche ereditarie (NBO). Nel punto di sangue essiccato, è possibile la determinazione degli amminoacidi (compresa la fenilalanina) e delle acil-carnitine. La determinazione quantitativa di queste sostanze consente di escludere diverse dozzine di malattie ereditarie appartenenti a diverse classi di NBO (disordini del metabolismo degli amminoacidi, acidi organici e difetti dell'ossidazione mitocondriale degli acidi grassi). Precedentemente, la diagnosi di questi disturbi richiedeva una grande quantità di materiale biologico, diversi studi (analisi degli amminoacidi, gas cromatografia / spettrometria di massa, determinazione dello spettro delle acilcarnitine), che richiedevano notevoli costi di tempo e di materiale. TMS ti consente di quantificare tutti questi composti in un'unica analisi! Disturbi ereditari del metabolismo degli amminoacidi, acidi organici e difetti della beta-ossidazione mitocondriale degli acidi grassi comprendono circa 100 forme nosologiche, la maggior parte delle quali si manifestano nel periodo neonatale. La loro frequenza è superiore a 1: 5000 neonati vivi. Molti medici credono erroneamente che le malattie di questo gruppo siano così rare che dovrebbero essere escluse solo per ultime, e molto spesso la diagnosi corretta viene stabilita già nelle fasi successive o la malattia non viene affatto diagnosticata.

Durante l'analisi, vengono determinati 52 indicatori (amminoacidi e acilici)

Materiale di prova: sangue capillare in forma secca

Preparazione per lo studio: no

Giorni di ricevimento: durante gli orari di apertura del centro medico

№ НБО1, Screening dei neonati. "PINGULUS" (analisi dello spettro degli aminoacidi e delle acil-carnitine)

  • Casi simili di malattia in famiglia.
  • Casi di morte improvvisa di un bambino in tenera età in famiglia.
  • Un forte deterioramento della condizione del bambino dopo un breve periodo di sviluppo normale (un periodo asintomatico può variare da alcune ore a diverse settimane).
  • Corpo insolito e / o odore di urina ("dolce", "topo", "cavolo bollito", "zampe sudate", ecc.).
  • Disturbi neurologici - disturbi della coscienza (letargia, coma), vari tipi di convulsioni convulsive, alterazioni del tono muscolare (ipotonia muscolare o tetraparesi spastica).
  • Disturbi del ritmo respiratorio (bradipnea, tachipnea, apnea).
  • Disturbi da altri organi e sistemi (danno epatico, epatosplenomegalia, cardiomiopatia, retinopatia).
  • Cambiamenti nei parametri di laboratorio del sangue e delle urine - neutropenia, anemia, acidosi metabolica / alcalosi, ipoglicemia / iperglicemia, aumento dell'attività degli enzimi epatici e del livello di creatina fosfochinasi, chetonuria.
  • Diagnostica aggiuntiva di 37 malattie metaboliche ereditarie insieme al programma statale obbligatorio per l'individuazione di 5 malattie ereditarie: screening dei neonati: "PECHET".

L'interpretazione dei risultati della ricerca contiene informazioni per il medico curante e non è una diagnosi. Le informazioni in questa sezione non possono essere utilizzate per l'autodiagnosi e l'auto-trattamento. Una diagnosi accurata viene fatta dal medico, utilizzando sia i risultati di questo esame sia le informazioni necessarie da altre fonti: anamnesi, risultati di altri esami, ecc.

Unità di misura nel laboratorio INVITRO: μmol / litro.

LABORATORIO DI SOSTANZE DELLA MALATTIA EREDITARIA

Indicazioni per l'analisi di TMS

La diagnosi clinica dei disordini metabolici congeniti degli amminoacidi, degli acidi organici e dei difetti dell'ossidazione mitocondriale può essere difficile, poiché queste malattie non hanno segni e sintomi specifici specifici. Ecco perché lo studio di tutti i pazienti dei reparti di patologia dei neonati, le unità di terapia intensiva per bambini possono aiutare nella rapida individuazione di queste malattie ereditarie.

Le indicazioni per lo studio delle acil-carnitine e degli amminoacidi con il metodo TMS sono:


7. Variazioni dei parametri ematici e urinari - trombocitopenia, neutropenia, anemia, acidosi / alcalosi metabolica, ipoglicemia / iperglicemia, aumento degli enzimi epatici e dei livelli di creatinfosfochinasi, chetonuria.

Analisi genetiche

Le ragazze, il neuropatologo, ci hanno indirizzato alla genetica (lei ha detto che la paralisi cerebrale non è la nostra diagnosi, anche se ha comunque portato il trattamento al sanatorio). Dimmi, chi si è imbattuto in questo, quanto è approssimativamente? Non so ancora cosa ci sarà inviato, ma mi piacerebbe sapere che cosa si deve preparare, questo non è un esame del sangue generale...

Applicazione mobile "Happy Mama" 4.7 Comunicare nell'applicazione è molto più conveniente!

Non posso dire tutto può essere. e tutto è diverso

Abbiamo dato un sacco di cose! Karyotype 4.000 rubli, TMS 4.000 rubli, amminoacidi urina 4 volte (10.000 rubli per tutti), amminoacidi del sangue 4 volte anche circa 10.000 rubli, sindrome di Drave 12.000 rubli, lattato molte volte, le consultazioni stesse non sono genetica economica e molte altre " curiosità. "Lo screening genetico non è economico!

Esame del sangue multi-steroideo: definizione di ormoni umani vitali a un livello qualitativamente nuovo

Il termine "analisi multi-steroide" si riferisce alla determinazione del profilo degli ormoni steroidei mediante gascromatografia-spettrometria di massa. La totalità dei risultati di questa analisi è indicata con il termine "profilo steroideo". In sostanza, questi sono due termini equivalenti per la stessa cosa.

L'analisi multisticoide è uno sviluppo domestico, il metodo di analisi è validato e certificato come "Metodo (metodo) di misurazione della concentrazione di massa degli ormoni steroidei nei campioni di sangue mediante cromatografia liquida - spettrometria di massa tandem.MU 08-47 / 376", registrata nel registro ROSSTANDART sotto il numero RF.1.31.2015.21875.

Attualmente, l'analisi multi-steroida non è inclusa nell'elenco dei test approvati dal Ministero della Sanità della Federazione Russa e viene effettuata come parte di uno studio scientifico. I pazienti stessi devono pagare il costo di questa analisi. Sono in corso lavori per garantire che in futuro tali spese siano coperte dalla medicina dell'assicurazione.

La determinazione quantitativa dei principali ormoni steroidei e dei loro metaboliti nel siero o nel liquido salivare con il metodo di riferimento - cromatografia in tandem - spettrometria di massa (nella letteratura scientifica questo metodo viene anche chiamato LC-MS / MS) è una procedura lunga e costosa. La caratteristica chiave del metodo è la capacità di determinare tutti gli analiti dichiarati nel corso di una singola analisi (Fig. 1), pertanto, in termini di un analita, il costo della determinazione è ottenuto quasi a meno che con metodi immunochimici alternativi.

Figura 1. Analiti, determinati nel corso di una singola analisi, secondo il metodo

Perché il nome del "sangue" del biomateriale nel nome della tecnica?

Al fine di identificare immediatamente la sua differenza dalla ben nota analisi "profilo delle urine steroidei". Va notato che il contenuto informativo dell'analisi delle urine è completamente diverso e richiede un'interpretazione diversa, poiché l'urina contiene per lo più forme inattive di steroidi: solfati, glucuronidi e derivati ​​idrossilati, già non necessari al corpo e derivati ​​da esso. Nel sangue, le concentrazioni di forme attive di ormoni steroidei che circolano nel sistema generale di afflusso di sangue, entrano nelle cellule e determinano un effetto segnale sul genoma.

Sotto quali condizioni mediche viene mostrata la determinazione del profilo ematico di steroidi, quali medici aiuteranno il profilo del sangue steroideo nella diagnosi?

1. Varie forme di disfunzione congenita della corteccia surrenale (VDCN). VDCH è una malattia congenita, manifestata in violazione della biosintesi degli steroidi. È causato dalla disfunzione di uno dei 5 enzimi della corteccia surrenale. Questo può essere un deficit di 21a-idrossilasi (CYP21) o 11b-idrossilasi (CYP11B1). Lo screening tradizionale dei neonati per HBRA mediante immunodosaggio spesso dà risultati falsamente positivi nella determinazione del 17-idrossiprogesterone. Pertanto, in tutti i casi discutibili, è necessaria la diagnosi di conferma con il metodo LC-MS / MS [1]. Diagnosticare una forma non classica VDKN (NF VDKN) con metodi immunochimici è una difficoltà significativa, quindi NF VDKN spesso non viene diagnosticato durante lo screening neonatale, ma si fa sentire in conseguenza: gli adolescenti sviluppano la massa corporea prematura, l'acne; nelle ragazze, nell'irsutismo, nella disfunzione mestruale e nei disturbi riproduttivi. Un aumento del 21-desossicortisolo e del 17-OH-progesterone è caratteristico del profilo steroideo nel VDKN NF, pertanto un'analisi multi-steroidale combinata con test genetici è estremamente utile per diagnosticare questa malattia.

2. Insufficienza surrenalica. Per questo viene eseguito un test di stimolazione con ACTH e vengono misurati i livelli di cortisolo, aldosterone e 11-desossicortisolo: basale, 30 e 60 minuti dopo la stimolazione. Nell'insufficienza surrenalica primaria, l'aldosterone non risponde alla stimolazione, mentre nell'insufficienza secondaria si registra un aumento del suo livello. Nel gruppo di controllo, il livello di 11-desossicortisolo è aumentato di 15-20 volte in risposta alla stimolazione dell'ACTH e il cortisolo è aumentato di circa 3 volte [2].

3. Ipogonadismo negli uomini. Una diagnosi corretta dell'ipogonadismo negli uomini richiede la determinazione del livello esatto del testosterone totale (TT) utilizzando la spettrometria di massa. In uno studio su 10.000 volontari, è stato rilevato che l'ipogonadismo può essere diagnosticato se la concentrazione TT è inferiore a 12,1 nmol / l secondo la spettrometria di massa [3].

4. Controllo della terapia sostitutiva negli uomini e nelle donne (HRT). Per questa categoria di pazienti, la spettrometria di massa è il "gold standard" perché consente di scegliere la dose terapeutica corretta dell'ormone (o stimolante), seguire dettagliatamente la risposta di tutti i metaboliti alla terapia sostitutiva ed evitare interferenze con metodi immunochimici [4-6].

5. È molto importante monitorare i livelli degli ormoni steroidei durante la gravidanza e per un anno dopo il parto. L'analisi multi-steroidale fornisce informazioni molto più accurate sullo stato androgenico rispetto al solfato di DHEA tradizionale.

6. Ginecologia. I tumori virilizzanti (che producono androgeni) delle ghiandole surrenali possiedono attività di produzione di androgeni e causano lo sviluppo della sindrome virale nelle donne. È stato stabilito che praticamente qualsiasi tumore ovarico ormonalmente attivo può essere una fonte di eccessiva produzione di androgeni e / o estrogeni e deve essere diagnosticato utilizzando il metodo della spettrometria di massa tandem [7].

7. Diabete Questa malattia colpisce il sistema nervoso e colpisce la concentrazione di neurosteroidi. LC-MS / MS consente di determinare la concentrazione di steroidi neuroattivi al fine di sviluppare nuovi approcci nel trattamento della nefropatia diabetica [8].

8. Medicina sportiva. Il profilo steroideo negli atleti nel sangue e nella saliva può fornire importanti informazioni sulla loro salute, fitness e controllo del corso di allenamento a causa della distribuzione ottimale dei carichi.

L'analisi multi-steroidea rende difficile la creazione di un posto nella vita, tenendo conto dell'uso diffuso dei metodi immunologici e della resistenza dei sostenitori delle tecnologie tradizionali. Ma dietro questo metodo è il futuro, è già riconosciuto come i migliori rappresentanti della scienza medica [9].

Cos'è ALS

La sclerosi laterale amiotrofica è la forma più comune di malattia dei motoneuroni, una malattia neurodegenerativa che colpisce i motoneuroni nel cervello e nel midollo spinale.

Diagnosi di SLA

I sintomi della SLA possono differire da persona a persona, poiché la malattia ha un carattere individuale e il tasso di progressione.

La sclerosi laterale amiotrofica è estremamente difficile da diagnosticare per diversi motivi:

  • questa è una malattia rara;
  • i primi sintomi sono piuttosto lievi, come la goffaggine, l'imbarazzo nelle mani o un discorso un po 'stanco, che possono essere il risultato di ragioni completamente diverse;
  • la malattia colpisce ogni persona in modi diversi, non esiste un sintomo definito che definisca chiaramente la SLA.

Se il terapeuta sospetta di avere un paziente affetto da SLA, dovrebbe indirizzarlo a un neurologo. Quindi una persona può avere una serie di esami diagnostici che possono essere eseguiti sia a livello ambulatoriale che nel reparto pazienti.

Esame del sangue

Gli studi mostreranno se i livelli di creatina chinasi sono elevati nel sangue. Questo enzima viene prodotto quando il tessuto muscolare viene distrutto e il suo livello può essere aumentato nelle persone affette da SLA. Ma questo indicatore non è un segno specifico di SLA, in quanto può essere un indicatore di altre malattie.

Elettroneuromiografia (ENMG)

Con ENMG, gli aghi sottili vengono utilizzati per registrare gli impulsi nervosi nei singoli muscoli. La registrazione viene solitamente effettuata da ciascun muscolo e muscoli bulbari (faringei). I muscoli che hanno perso la loro innervazione si trovano perché la loro attività elettrica è diversa dall'attività dei muscoli sani. I risultati di ENMG possono differire dalla norma, anche se un particolare muscolo non è ancora affetto dalla malattia.

Quando ENMG controlla la velocità dell'impulso lungo le fibre nervose. Per fare ciò, un piccolo impulso viene fatto passare attraverso una piccola guarnizione a contatto con la pelle. Questo è un metodo diagnostico molto importante per la ricerca.

Stimolazione magnetica transcranica (TMS)

Questo è un nuovo metodo che può essere eseguito contemporaneamente con ENMG. È progettato per valutare lo stato dei motoneuroni del cervello. I risultati del TMS possono aiutare a fare una diagnosi.

Magnetic Resonance Imaging (MRI)

La MRT può rilevare danni al sistema nervoso causati da ictus, morbo di Alzheimer, morbo di Parkinson, sclerosi multipla, tumori e lesioni del midollo spinale e del cervello. La MRT non rivela cambiamenti specifici nella SLA, poiché il danno causato da questa malattia non influisce sulle immagini. Questo metodo di ricerca viene utilizzato per escludere malattie con sintomi simil-ALS.

Altri metodi

Il neurologo può decidere di condurre ulteriori esami come la puntura lombare o la biopsia muscolare, se qualcosa indica la loro necessità. Ma questi test non sono sempre utilizzati nella diagnosi di SLA.

Applicazione tandem
spettrometria di massa (HPLC-MSMS)
nella diagnosi clinica

La spettrometria di massa è la prospettiva dello sviluppo della chimica clinica, il futuro in cui una rivoluzione nella diagnostica clinica porterà all'uso diffuso della spettrometria di massa.
(Michael Ulerich, Dipartimento di chimica clinica, Georg-August University, Gottinga, Germania)

Secondo una recensione pubblicata in Recensioni cliniche biochimiche, l'uso della cromatografia liquida ad alte prestazioni combinato con la spettrometria di massa tandem (HPLC-MS / MS) nei laboratori clinici è aumentato enormemente negli ultimi 10-12 anni. Gli autori osservano che la specificità dell'analisi HPLC-MS / MS è significativamente superiore ai metodi immunologici e alla cromatografia liquida ad alte prestazioni classica (HPLC) nell'analisi di molecole a basso peso molecolare e ha prestazioni significativamente superiori rispetto alla gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS). La popolarità di questo metodo nelle analisi cliniche di routine è attualmente spiegata dalle capacità uniche del metodo.

    I principali vantaggi del metodo HPLC-MS / MS sono:

  • La possibilità di un'accurata analisi quantitativa di piccole molecole;
  • Analisi simultanea di più composti bersaglio;
  • Specificità unica;
  • Analisi ad alta velocità.
  • Negli ultimi anni, molta attenzione è stata dedicata al tempo di analisi e, di conseguenza, a un aumento della produttività del laboratorio. Una significativa riduzione dei tempi di analisi è stata resa possibile dall'uso di colonne analitiche corte per HPLC / MS / MS, aumentando nettamente la specificità dell'analisi. L'uso del metodo di ionizzazione a pressione atmosferica (API), lo spettrometro di massa triplo quadrupolo in tandem e la cromatografia liquida ad alte prestazioni avanzate, nonché i metodi appropriati per la preparazione del campione, hanno portato HPLC-MS / MS all'avanguardia dei moderni metodi analitici per studi clinici.

      Le principali aree di applicazione di HPLC / MS / MS nella medicina clinica sono:

  • Ottenere un profilo completo del metabolismo degli steroidi (pannelli di steroidi), purine e pirimidine e altri composti,
    screening dei neonati per errori metabolici congeniti (identificazione di diverse dozzine di malattie in un'unica analisi);
  • Monitoraggio terapeutico di farmaci - immunosoppressori, perivosudorozhnyh, antiretrovirali, anticoagulanti e qualsiasi altro - indipendentemente dalla presenza dei kit del produttore. Non è necessario acquistare kit costosi per ogni sostanza: è possibile sviluppare i propri metodi;
  • Tossicologia clinica: analisi di oltre 500 composti narcotici e dei loro metaboliti in un'unica analisi, senza analisi di conferma
    proteomica e metabolomica.
  • Inoltre, HPLC-MSMS viene utilizzato per analizzare gli oligosaccaridi delle urine, i solfatidi, gli acidi grassi a catena lunga, gli acidi biliari a catena lunga, l'acido metilmalonico, gli studi di porfiria, lo screening dei pazienti con compromissione del metabolismo delle purine e della pirimidina.

    Esempi di applicazione della cromatografia liquida
    in combinazione con spettrometria di massa tandem in analisi cliniche.

    Screening dei neonati: il primo esempio dell'uso massiccio di HPLC-MS / MS nella diagnosi clinica è stato lo screening degli errori metabolici congeniti nei neonati. Attualmente nei paesi sviluppati, questo è un metodo di routine e copre più di 30 diverse malattie, tra cui acetademie, aminoacidopatie e difetti di ossidazione degli acidi grassi. Di particolare rilievo sono gli studi sui difetti alla nascita che possono portare a seri problemi se non vengono prese misure immediate (ad esempio, ingrossamento del cuore o del fegato o edema cerebrale). Il vantaggio dell'utilizzo di HPLC-MS / MS per lo screening dei neonati è la capacità di analizzare simultaneamente tutti gli amminoacidi e le acil-carnitine in un metodo rapido, economico e altamente specifico.

    Monitoraggio terapeutico dei farmaci: lo sviluppo e l'introduzione del sirolimus immunosoppressore (rapamicina) per prevenire il rigetto d'organo dopo il trapianto è stato uno dei principali incentivi per l'introduzione di HPLC-MS / MS nei laboratori clinici. L'attuale metodo HPLC-MS / MS consente la determinazione simultanea di tacrolimus, sirolimus, ciclosporina, everolimus e acido micofenoico.

    HPLC-MS / MS è anche usato per analizzare citotossici, farmaci antiretrovirali, antidepressivi triciclici, anticonvulsivanti e altri farmaci che richiedono un dosaggio individuale.

    Il metodo HPLC-MSMS consente la separazione e la determinazione quantitativa degli enantiomeri R- e S di warfarin nell'intervallo di concentrazione di 0,1-500 ng / ml.

    Sostanze narcotiche e analgesiche: HPLC-MS / MS è ampiamente utilizzato per l'analisi di questi composti a causa della semplicità della preparazione del campione e del breve tempo di analisi. Attualmente, il metodo è utilizzato nei laboratori clinici per lo screening per la presenza di una vasta gamma di sostanze stupefacenti. L'esclusiva specificità e sensibilità del metodo consente di analizzare simultaneamente più di 500 composti di classi diverse in un campione con una preparazione minima del campione. Quindi, nel caso dell'analisi delle urine, è sufficiente una semplice diluizione del campione da 50 a 100 volte. Quando si analizzano i capelli, invece di un fascio di 100-200 capelli, un singolo capello è sufficiente per rilevare in modo affidabile i fatti del consumo di droga.

    Endocrinologia e analisi degli steroidi: HPLC-MS / MS è ampiamente usato in molti laboratori di endocrinologia per l'analisi degli steroidi - testosterone, cortisolo, aldersterone, progesterone, estriolo e molti altri.

    Sempre più laboratori stanno iniziando a utilizzare HPLC-MS / MS per determinare i livelli ematici di vitamina D3 e D2.

    I. Definizione di steroidi (profilo steroide).

    I laboratori di ospedali e cliniche sono attualmente in grado di eseguire la determinazione simultanea di diversi steroidi utilizzando HPLC / MS / MS. Allo stesso tempo, non è necessario un ampio volume di campioni, che è particolarmente importante quando si analizzano campioni di bambini.

      Casi in cui è consigliabile effettuare la determinazione di diversi steroidi (di profilazione):

  • Iperplasia surrenale congenita (iperplasia surrenale congenita, CAH) è un difetto congenito nella biosintesi degli steroidi. Questo è un gruppo ereditario di malattie causate da attività impropria degli enzimi della corteccia surrenale, che porta ad una diminuzione della produzione di cortisolo. Per una diagnosi affidabile di SAN, si consiglia di determinare cortisolo, androstenedione e 17-idrossiprogesterone. HPLC / MS / MS consente un'accurata determinazione quantitativa di tutti e tre gli steroidi in un'unica analisi con un'accuratezza del 100%.
  • Lo screening di routine dei neonati mediante immunodosaggio è caratterizzato da un alto livello di risultati positivi e falsi negativi. La determinazione di HPLC / MS / MS non solo di cortisolo, ma anche di aldosterone e 11-desossicortisolo rende possibile distinguere l'insufficienza primaria della corteccia surrenale dal secondario.
  • HPLC / MS / MS consente la determinazione degli steroidi per la prostatite e la sindrome da dolore pelvico cronico.
  • HPLC-MS / MS consente di determinare il profilo degli steroidi e identificare le cause della pubertà prematura associate alla corteccia surrenale nei bambini piccoli. Si è riscontrato che le concentrazioni di testosterone, androstenedione, deidroepiandrosterone (DHEA) e il suo solfato in questi bambini erano leggermente più alti rispetto a quelli dei bambini più grandi nel gruppo di controllo.
  • Siero ematico di fumatori attivi, fumatori passivi e non fumatori viene analizzato per la presenza di 15 ormoni steroidei e ormoni tiroidei per studiare la relazione tra i pazienti esposti al fumo e le concentrazioni ormonali.
  • HPLC / MS / MS è usato per profilare determinati ormoni steroidei femminili nelle urine.
  • Utilizzando HPLC / MS / MS, sono state valutate le concentrazioni di ormoni neuroattivi per prevenire la neuropatia diabetica.
  • II. Determinazione degli ormoni tiroidei

    I metodi di routine per determinare gli ormoni tiroidei sono di solito basati sul dosaggio radioimmunologico, che è costoso e consente di determinare solo T3 e T4, il che può limitare la capacità di determinare e controllare completamente le funzioni della ghiandola tiroidea.

    • Attualmente, utilizzando HPLC-MSMS, viene eseguita un'analisi simultanea su campioni di siero di cinque ormoni tiroidei, tra cui tiroxina (T4), 3,3 ', 5-triiodotironina (T3), 3,3', 5'- (rT3), 3, 3'-diiodotironina (3,3'-T2) e 3,5-diiodotironina (3,5-T2) nell'intervallo di concentrazione di 1-500 ng / ml.
    • Il metodo HPLC / MS / MS viene anche utilizzato per analizzare la composizione degli ormoni dei pazienti sottoposti a tiroidectomia. Vengono determinati i livelli di concentrazione di tiroxina (T4), triiodotironina (T3), T4 libero e stimolazione dell'ormone tiroideo (TSH) dopo l'intervento chirurgico. HPLC / MS / MS è stato trovato per essere un ottimo modo per stabilire la relazione tra TSH e le concentrazioni di ormoni tiroidei.
    • Il metodo HPLC / MS / MS è stato utilizzato per determinare la tiroxina (T4) nella saliva e nel siero umano. Il metodo è caratterizzato da un'elevata riproducibilità, accuratezza e limite di rilevazione di 25 pg / ml. Gli studi hanno dimostrato che esiste una relazione diagnostica nelle concentrazioni di T4 nella saliva tra soggetti eutiroidei e pazienti con malattia di Graves.

    Il metodo HPLC / MS / MS ha attualmente la sensibilità, la specificità e la precisione necessarie per determinare in modo affidabile tutti gli steroidi nei fluidi biologici e quindi migliora le capacità diagnostiche, specialmente nel caso di determinazione degli steroidi.

    III. Determinazione della 25-ossivitamina D mediante HPLC / MS / MS

    La 25-idrossi vitamina D (25OD) è la principale forma circolante di vitamina D e precursore della sua forma attiva. (1,25-diossivitamina D). In considerazione del lungo periodo della sua emivita, la determinazione del 25OD è importante per determinare lo stato della vitamina D nel corpo del paziente. La vitamina D esiste in due forme: vitamina D3 (colecalciferolo) e vitamina D2 (ergocalciferolo). Entrambe le forme sono metabolizzate nelle corrispondenti forme 25OD. La disponibilità di metodi analitici in grado di determinare entrambe le forme di vitamina con elevata accuratezza e consentire il monitoraggio di pazienti con ridotta vitamina D è molto importante per la diagnosi.I metodi utilizzati finora non hanno consentito la determinazione separata della vitamina D2 e ​​D3. Inoltre, a concentrazioni elevate di vitamina D2, la quantità rilevabile di D3 è sottostimata. Un altro svantaggio è l'uso di isotopi radioattivi. L'uso del metodo HPLC / MS / MS ha reso possibile non solo evitare l'uso di isotopi radioattivi, ma anche effettuare la determinazione separata di entrambe le forme attive della vitamina.

        Il metodo è applicabile ai seguenti pazienti:

  • Se sospetti un basso contenuto di vitamina D nel corpo;
  • Se si sospetta un effetto tossico inspiegabile;
  • Quando si esaminano pazienti sottoposti a trattamento per un basso contenuto di vitamina D;
  • L'uso di HPLC / MS / MS ha consentito la determinazione separata di entrambe le forme durante il monitoraggio del paziente.
  • IV. Determinazione degli immunosoppressori mediante HPLC / MS / MS

    Dopo il trapianto di organi, è necessario assumere immunosoppressori per tutta la vita per evitare la reazione di rigetto. In possesso di un intervallo terapeutico molto stretto e alta tossicità, gli immunosoppressori richiedono un dosaggio individuale per ottenere il massimo effetto. Pertanto, è fondamentale monitorare i principali immunosoppressori: ciclosporina A, tacrolimus, sirolimus ed everolimus per controllare la dose di farmaci per ogni singolo paziente a seconda della concentrazione del farmaco nel sangue.

    Il dosaggio immunologico è ancora utilizzato per monitorare i farmaci elencati, ma questi metodi sono costosi e la loro specificità, accuratezza e riproducibilità sono limitati. Ci sono casi di morte di pazienti da dosaggio improprio di immunosoppressori, sulla base dei risultati ottenuti utilizzando metodi immunologici. Attualmente, i test immunologici vengono sostituiti nei laboratori clinici con HPLC / MS / MS. Pertanto, circa 70 campioni sono analizzati giornalmente presso la Clinica dell'Università di Monaco per il contenuto di sirolimus e ciclosporina A utilizzando un sistema HPLC / MS / MS. Tutti i campioni di preparazione e controllo del dispositivo sono eseguiti da un dipendente. Il laboratorio passa anche all'analisi tacrolimus con questo metodo.

    • È stato descritto l'uso di HPLC / MS / MS per la determinazione simultanea di routine di tacrolimus, sirolimus, ascomicina, demetiksisirolimus, ciclosporina A e ciclosporina G nel sangue. L'intervallo è determinato dalla concentrazione di 1,0 - 80,0 ng / ml. Per ciclosporina 25 - 2000 ng / ml. Durante l'anno sono stati analizzati oltre 50.000 campioni in laboratorio.
    • Poiché è stato riscontrato che l'uso simultaneo di tacrolimus e sirolimus ha un effetto terapeutico positivo, per le analisi cliniche è stato sviluppato un metodo HPLC / MS / MS semplice ed efficace per la loro determinazione separata nel sangue. L'analisi di un campione richiede 2,5 minuti con una precisione del 2,46% - 7,04% per tacrolimus e 5,22% - 8,30% per sirolimus per l'intera curva analitica. Il limite inferiore della determinazione di tacrolimus è 0,52 ng / ml, sirolimus - 0,47 ng / ml.

    V. Determinazione dell'omocisteina mediante HPLC / MS / MS

    L'omocisteina interessa le malattie cardiovascolari (tromboembolia, malattie cardiache, aterosclerosi) e altre condizioni cliniche (depressione, morbo di Alzheimer, osteoporosi, complicazioni durante la gravidanza, ecc.). I test di omocisteina esistenti, inclusi i test immunologici, sono costosi. Un rapido metodo HPLC / MS / MS è stato sviluppato per analizzare l'omocisteina per uso clinico di routine durante l'analisi di un numero elevato di campioni. La ionizzazione è stata effettuata con il metodo dell'elettrospray. Il metodo è riproducibile, altamente specifico e accurato. I vantaggi del metodo sono anche il basso costo dei reagenti e la facilità di preparazione del campione. È possibile analizzare 500 o più campioni al giorno.

    conclusione

    Va notato che sebbene siano attualmente in uso metodi di immunodosaggio significativamente migliorati, a causa di limiti tecnici fondamentali, questo metodo non avrà mai una precisione e una specificità della sostanza target paragonabile a HPLC-MSMS, specialmente in presenza di metaboliti. Ciò non solo porta a una bassa accuratezza del metodo ELISA e ad un'alta percentuale di risultati falsi positivi e falsi negativi, ma non consente di confrontare i risultati ottenuti in diversi reparti clinici utilizzando il metodo ELISA. L'uso di HPLC-MS / MS elimina questo inconveniente, consente un'analisi altamente specifica, accurata e rapida di un gran numero di campioni con elevata sicurezza in presenza di metaboliti e in assenza di interferenze da sostanze correlate ed endogene nel plasma e nel sangue dei pazienti.

    Nonostante l'apparente alto costo del complesso di strumenti, come dimostra la pratica mondiale, con un funzionamento corretto, questo complesso si ripaga in 1-2 anni. Ciò è dovuto principalmente al basso costo di un'analisi a causa dell'analisi simultanea di decine e centinaia di connessioni e all'assenza della necessità di acquistare costosi kit diagnostici. Inoltre, il laboratorio ha l'opportunità di sviluppare autonomamente tutti i metodi di analisi necessari e di non dipendere dal produttore dei kit.

    Scegliere la giusta configurazione del complesso di strumenti

    Esistono numerosi metodi diversi di spettrometria di massa e tipi di spettrometri di massa progettati per risolvere una vasta gamma di compiti - dall'identificazione strutturale di macromolecole di proteine ​​complesse che pesano centinaia di migliaia di Dalton all'analisi quantitativa di routine ad alte prestazioni di piccole molecole.

    Per eseguire con successo l'attività, una delle condizioni di base è la selezione del giusto tipo di attrezzatura. Non esiste un dispositivo universale che consenta di risolvere l'intera gamma di compiti analitici. Pertanto, un dispositivo progettato per risolvere il problema dell'identificazione dei microrganismi non è in grado di condurre analisi quantitative di piccole molecole. E viceversa. Il fatto è che, nonostante il nome comune, si tratta di dispositivi completamente diversi che operano su principi fisici diversi. Nel primo caso, si tratta di uno spettrometro di massa del tempo di volo con una sorgente di ionizzazione laser, MALDI-TOF, e nel secondo, un triplo quadrupolo con ionizzazione elettrospray, HPLC-MSMS.

    Il secondo parametro più importante è la scelta della corretta configurazione del sistema. Ci sono diversi importanti produttori di apparecchiature per spettrometria di massa. I dispositivi di ciascun produttore non solo hanno i propri punti di forza, ma anche punti deboli, che di solito preferiscono tacere. Ogni produttore produce la propria linea di dispositivi. Il costo di un complesso analitico è compreso tra $ 100.000 e 1.000.000 o più dollari. La scelta del produttore ottimale e la corretta configurazione dell'apparecchiatura non solo consentiranno di risparmiare risorse finanziarie significative, ma anche di risolvere in modo più efficace l'attività. Sfortunatamente, ci sono molti esempi in cui il laboratorio è stato equipaggiato senza tener conto di questi fattori. Il risultato: attrezzature inattive, denaro sprecato.

    Il terzo fattore che determina il successo del laboratorio è lo staff. Gli spettrometri di massa richiedono personale altamente qualificato. Sfortunatamente, non una singola università in Russia ha un corso di spettrometria di massa moderna e pratica, specialmente in relazione alle applicazioni cliniche, e il compito di formare il personale di ogni laboratorio deve essere risolto da solo. Naturalmente, 2-3 giorni di formazione per familiarizzare condotti dal produttore dopo il lancio dell'apparecchiatura sono assolutamente insufficienti per comprendere le basi del metodo e acquisire competenze nel dispositivo.

    Il quarto fattore è la mancanza di metodi di analisi pronti all'uso. Ogni laboratorio ha le sue priorità, per le quali è necessario sviluppare i propri metodi. Questo può essere fatto da una persona con almeno 2-3 anni di esperienza nel dispositivo. Le aziende manifatturiere a volte forniscono uno o due metodi generali di natura raccomandativa, ma non le adattano ai compiti specifici del laboratorio.

    Nella "BioPharmEkspert" LLC ci sono specialisti con molti anni di esperienza nella lavorazione di vari tipi di spettrometri di massa, nonché lo sviluppo di metodi e la formulazione di analisi ad alte prestazioni. Pertanto, forniamo i seguenti servizi:

    1. Selezione della configurazione ottimale del dispositivo per compiti specifici del cliente.
    2. Acquisto, consegna e messa in funzione di attrezzature dai principali produttori di spettrometri di massa tandem Formazione graduale del personale entro un anno dal momento del lancio dell'apparecchiatura.
    3. Una serie di metodi e database pronti all'uso per risolvere problemi clinici di base.
    4. Sviluppo di metodi di analisi e risoluzione di compiti specifici del cliente nel suo laboratorio con il coinvolgimento del suo staff.
    5. Supporto metodico in tutte le fasi del lavoro.

    Analisi del sangue con derivatizzazione preliminare (derivati ​​TMS)

    Gascromatografia bidimensionale - spettrometria di massa al tempo di volo per analisi al plasma con derivatizzazione preliminare (derivati ​​TMS), che dimostra la determinazione del glucosio 5TMS

    L'analisi dei metaboliti del plasma sanguigno mediante spettrometria di massa gas cromatografia-tempo-di-volo bidimensionale con derivatizzazione preliminare (derivati ​​TMS) dimostra il rilevamento di glucosio 5TMS con un grado di coincidenza di 901.